別嘌呤醇對尿酸誘導(dǎo)的平滑肌細(xì)胞賴氨酰氧化酶表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　 通過研究尿酸誘導(dǎo)的平滑肌細(xì)胞賴氨酰氧化酶(LOX)表達(dá)的變化及別嘌呤醇對LOX的調(diào)節(jié)作用,探討別嘌呤醇延緩動脈粥樣硬化的機(jī)制,為別嘌呤醇的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 人工傳代培養(yǎng)大鼠血管平滑肌細(xì)胞,選擇生長良好的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。MTT法檢測不同濃度尿酸(20 mg/L、40 mg/L、60mg/L)作用48h和40mg/L尿酸作用不同時(shí)間(24h、48h、72h)后平滑肌細(xì)胞的增殖情況

2、。用激光共聚焦顯微鏡觀察不同濃度尿酸和在40 mg/L尿酸中加入不同劑量別嘌呤醇(0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.3mmol/L)作用24h后平滑肌細(xì)胞內(nèi)活性氧的生成及清除情況。在40 mg/L尿酸與0.3mmol/L別嘌呤醇的混合液中加入10mg/mLβ-氨基丙腈作用24h后,用RT-PCR法檢測不同劑量別嘌呤醇及加入β-氨基丙腈后平滑肌細(xì)胞內(nèi)LOX、NF-κB、MMP-2 mRNA的表達(dá)情況,用Western Blot法

3、檢測加入β-氨基丙腈前后平滑肌細(xì)胞內(nèi)LOX蛋白的表達(dá)情況。各實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件,以O(shè)ne-way ANOVA分析各組別之間的差異,各組間的比較采用SNK檢驗(yàn)。
　　 結(jié)果:
　　 1.不同濃度尿酸作用平滑肌細(xì)胞48h后,細(xì)胞增殖量均增加,且呈濃度依賴性(P＜0.01)。尿酸作用不同時(shí)間后細(xì)胞增殖量也增加,且呈時(shí)間依賴性(P＜0.01)。
　　 2.與空白對照組相比,不同濃度尿

4、酸作用平滑肌細(xì)胞后活性氧的生成量增加,且呈濃度依賴性(P＜0.01);加入不同劑量別嘌呤醇后,活性氧的生成量明顯減少,且呈劑量依賴性(P＜0.01)。
　　 3.與空白對照組相比,尿酸40mg/L組平滑肌細(xì)胞LOX、NF-κB及MMP-2的mRNA表達(dá)水平明顯升高(P＜0.01);加入不同劑量別嘌呤醇和β-氨基丙腈后,平滑肌細(xì)胞LOX、NF-KB及MMP-2的mRNA表達(dá)水平均下調(diào),且呈劑量依賴性(P＜0.01)。
　　

5、 4.與空白對照組相比,尿酸40mg/L組平滑肌細(xì)胞LOX蛋白表達(dá)明顯升高(P＜0.01);加入不同劑量別嘌呤醇和β-氨基丙腈后,平滑肌細(xì)胞LOX蛋白表達(dá)明顯下降(P＜0.01)。
　　 結(jié)論:
　　 1.尿酸能誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞增殖。
　　 2.尿酸誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞增殖后LOX表達(dá)明顯增高,且MMP-2、NF-κB表達(dá)也明顯增高,提示LOX、NF-κB信號通路可能與動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展有關(guān),MMP-2的上調(diào)