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文檔簡介
1、背景:
結腸癌是人類最常見的消化道惡性腫瘤之一,其發(fā)病率呈明顯上升趨勢。目前臨床治療上以手術和化療為主。此外,針對表皮生長因子受體(EGFR)家族的靶向治療藥物(如吉非替尼)也已應用于臨床多年。盡管多項臨床前研究均已證實吉非替尼較好的抗腫瘤活性,進一步的臨床研究卻發(fā)現,有較高比例患者對該類治療存在原發(fā)或繼發(fā)性耐受。因此,為預測患者對治療的敏感性,選擇可受益患者接受治療,有必要進一步探討吉非替尼的耐受機制。近年研究發(fā)現在膀胱癌及
2、非小細胞肺癌中,microRNA-200c及上皮間質轉化(EMT)與EGFR抑制劑療效敏感性之間具有密切聯系。
目的:探討結腸癌細胞中microRNA-200c及EMT表型與EGFR抑制劑療效敏感性間的關系
方法:
1. qRT-PCR法、western blot法檢測四株結腸癌細胞中EMT相關基因表達情況。
2. qRT-PCR法檢測四株結腸癌細胞中microRNA-200c表達水平
3、3. CCK-8法檢測四株結腸癌細胞對吉非替尼的藥物敏感性。
4.外源性上調或下調 microRNA-200c表達,觀察 EMT相關基因表達變化
5.外源性上調或下調microRNA-200c表達,觀察其對吉非替尼敏感性的影響。
結果:
1.四株結腸癌細胞系之間存在明顯的EMT表型差異,HT29細胞中E-cadherin表達量最高,vimentin及ZEB1表達缺失,HCT116及SW480細胞中
4、E-cadherin表達量依次降低,SW620細胞中E-cadherin表達量最低,且間質細胞表型標志分子vimentin及ZEB1呈高表達。
2. microRNA-200c在HT29中表達量最高,在HCT116和SW480中表達較高但均低于HT29中表達量,在SW620中表達水平極低。
3. HT29對吉非替尼最為敏感,HCT116和SW480為中度敏感;而SW620對吉非替尼相對不敏感。
4.在HT2
5、9細胞中下調microRNA-200c表達后,ZEB1 mRNA表達水平明顯上調(蛋白水平表達極低,轉染前后均檢測不出),E-cadherin表達明顯下調,vimentin表達明顯上調;SW620細胞中過表達microRNA-200c后,ZEB1明顯下調,E-cadherin明顯上調,vimentin明顯下調。
5.在 HT29細胞中下調 microRNA-200c表達后,其對吉非替尼敏感性明顯降低;而上調 microRNA-
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