缺氧環(huán)境下shRNA下調MTDH基因對人乳腺癌MCF-7細胞增殖及凋亡的影響.pdf

1、研究背景和意義:大量的研究表明,腫瘤周圍微環(huán)境可引起腫瘤細胞基因組的不穩(wěn)定,缺氧是惡性腫瘤微環(huán)境的重要特征。在缺氧環(huán)境下,部分腫瘤細胞基因組發(fā)生改變而呈現(xiàn)出更強的生存和侵襲能力,其中缺氧誘導因子1-α(HIF-1α)起主要調控作用。缺氧環(huán)境下,HIF-1α對促進腫瘤細胞的代謝、新生血管的形成和促進腫瘤的增殖、侵襲、轉移及誘發(fā)腫瘤細胞耐藥等起重要作用,其表達水平與腫瘤不良預后呈正相關。
　　乳腺癌是全球女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤。轉移

2、粘附基因(metadherin,MTDH),在正常乳腺組織、乳腺增生組織中低表達或不表達,然而在乳腺癌組織中高表達,其與乳腺癌惡性生物學行為呈正相關。已有研究證實,過表達的MTDH基因可以促進HIF-1α的表達;另外的研究也表明,利用siRNA干擾HIF-1α后,MTDH表達也隨之降低。研究者們推測MTDH與HIF-1α形成了一個相互調控的正反饋環(huán),提示MTDH基因在缺氧環(huán)境下對促進腫瘤細胞的惡性生物學行為可能起到重要的作用。因此,探索

3、MTDH基因在缺氧環(huán)境下對乳腺癌細胞生物學特性的調控作用,可幫助人們進一步理解缺氧微環(huán)境對乳腺癌細胞造成的影響。
　　本研究采用氯化鈷模擬缺氧微環(huán)境,通過shRNA下調MTDH基因表達,觀察人乳腺癌MCF-7細胞系在增殖及凋亡方面生物學行為的變化,以及相關分子表達水平的改變,以期初步了解缺氧環(huán)境下MTDH基因對乳腺癌細胞的調控作用。
　　目的:探討缺氧環(huán)境下MTDH表達下調對人乳腺癌MCF-7細胞增殖及凋亡的影響。
　

4、　方法:1.利用氯化鈷模擬缺氧環(huán)境,采用RT-PCR及Western blot檢測HIF-1α及MTDH基因在缺氧環(huán)境下表達水平的改變;2.將MTDH基因的干擾質粒MTDH-shRNA和陰性對照質粒Control-shRNA分別轉染MCF-7細胞,轉染24h后觀察轉染效率,應用RT-PCR及Western blot檢測MTDH基因在mRNA和蛋白水平上的變化,驗證沉默效果;3.MTT實驗檢測下調MTDH基因表達后對缺氧環(huán)境下MCF-7細

5、胞增殖的影響,Hoechst33258染色及流式細胞術檢測細胞凋亡的情況;4.RT-PCR及Western blot檢測HIF-1α在mRNA和蛋白水平上的變化,觀察下調MTDH基因對HIF-1α表達的影響。
　　結果:1.在氯化鈷模擬缺氧環(huán)境下,MCF-7細胞HIF-1αmRNA表達水平無變化,HIF-1α蛋白表達水平在一定范圍內隨缺氧時間延長而升高,MTDH mRNA及蛋白表達水平均逐漸升高;2.轉染效率達70％,MTDH-s