潰瘍性結腸炎大鼠結腸組織中c-fos表達的變化及西帕依潰結安免疫保護機制的研究.pdf

1、目的：建立潰瘍性結腸炎(Ulcerative colitis，UC)的大鼠模型，研究UC大鼠結腸組織中c-fos表達的變化及西帕依潰結安的免疫保護機制；為應用RNA干擾(RNA interference，RNAi)技術探討UC發(fā)病的敏感點及維藥西帕依潰結安治療作用靶點，構建大鼠c-fos基因的真核表達載體。方法：健康Wistar大鼠分為正常組(n=10)、潰瘍性結腸炎模型組(n=11)、西帕依潰結安干預組(n=14)、5-氨基水楊酸組(

2、陽性對照組，n=14)及生理鹽水組(陰性對照組，n=15)共5組，用2、4-二硝基氯苯(2，4-dinitrochlorobenzene，DNCB)與乙酸復合法制備大鼠潰瘍性結腸炎模型。采用RT-PCR和Western blot的方法檢測大鼠結腸組織中c-fos表達的變化；構建pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO-c-fos重組質粒，鑒定正確后以Lipofectamine 2000介導，將其導入COS-7細胞，倒置熒光顯微鏡觀察，并

3、用Western blot方法驗證其蛋白的表達。結果：模型組大鼠從體征、癥狀、結腸粘膜損傷情況、病理切片結果均提示已成功建立UC大鼠的模型；c-fos表達在蛋白水平上的半定量結果顯示：UC模型組大鼠c-Fos蛋白的表達與正常組相比明顯升高，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；經治療后西帕依潰結安干預組大鼠c-Fos蛋白的表達與UC模型組相比明顯降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；生理鹽水組大鼠c-Fos蛋白的表達高于西帕依潰結安干

4、預組，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；c-fos表達在mRNA水平上的半定量結果顯示組間無統(tǒng)計學意義。經PCR和測序鑒定表明，克隆出大鼠結腸組織c-fos的編碼序列同GeneBank收錄的序列一致，表明真核表達質粒的構建正確。以脂質體轉染COS-7細胞后，用倒置熒光顯微鏡觀察和Western blot檢測表明，細胞可表達融合蛋白。結論：c-fos表達的變化可能與UC的發(fā)生、發(fā)展相關聯(lián)；維藥西帕依潰結安治療UC的作用可能與其降低了c-