潰結安康湯對潰瘍性結腸炎大鼠模型影響及機制研究.pdf

1、目的：通過中藥潰結安康湯對潰瘍性結腸炎（UC）大鼠模型影響及機制研究，從潰瘍性結腸炎大鼠模型的一般狀態(tài)、肉眼觀察大鼠結腸組織、顯微鏡觀察（HE染色）大鼠結腸組織、大鼠腸電圖（頻率和波幅）、大鼠結腸組織氧自由基（MDA含量和SOD活性）、大鼠結腸組織炎性細胞因子（IL-1β、IL-10和TNF-α）的含量及蛋白表達、大鼠結腸組織表皮生長因子（EGF）的含量及mRNA表達等方面，探討中藥潰結安康湯治療潰瘍性結腸炎大鼠模型的治療效果，并從多環(huán)

2、節(jié)、多層次探討其作用的可能靶點及機制，以期為中醫(yī)藥治療潰瘍性結腸炎提供實驗依據。
　　 材料與方法：
　　 1．模型制作方法
　　 健康Wistar大鼠60只，雌雄各半，雌雄分籠飼養(yǎng)，體重180-220g。適應性喂養(yǎng)1周，確定大鼠健康后，隨機分為對照組（12只），造模組（48只）。造模組采用TNBS/乙醇法造模，對照組則等量生理鹽水灌腸。3d后，隨機抽取1只對照組大鼠和4只造模組大鼠，麻醉后，取結腸，進行組織形態(tài)

3、學觀察確認造模是否成功。
　　 2．分組
　　 對照組大鼠11只，為正常組；造模組大鼠隨機分為4組：模型組、柳氮磺胺吡啶（SASP）組、補脾益腸丸組、潰結安康湯組，每組11只（各組大鼠均雌雄分籠飼養(yǎng)）。
　　 3．給藥
　　 從造模第4d開始，根據人與大鼠之間等效劑量換算，補脾益腸丸組大鼠按1.62g/kg劑量，給予濃度為0.108g/ml補脾益腸丸3ml，日一次灌胃，連續(xù)灌胃21d； SASP組大鼠按0

4、.36g/kg劑量，給予濃度0.024g/ml SASP3ml，日一次灌胃，連續(xù)灌胃21d；潰結安康湯組大鼠按18g/kg劑量，給予濃度1.2g/ml潰結安康湯3ml，日一次灌胃，連續(xù)灌胃21d。正常組和模型組大鼠用生理鹽水3ml，日一次灌胃，連續(xù)灌胃21d。
　　 4．灌流與取材
　　 4.1灌流
　　 各組大鼠于灌胃第21d晚，禁食不禁水，第22d，腹腔注射10％水合氯醛（0.2ml/100g）將各組大鼠麻醉

5、，把大鼠固定于灌流臺上，剖開大鼠胸腔，經左心室快速灌流37℃生理鹽水30-50ml，繼之灌注4℃的4％多聚甲醛溶液（PBS配制，PH7.2-7.4）30-50ml。
　　 4.2取材
　　 灌流后，切開腹腔，從肛門以上2cm處，向上截取大鼠結腸組織6-8cm，沿大鼠腸系膜緣縱向剖開腸腔，用生理鹽水沖洗干凈，然后將截取的大鼠結腸組織向上平鋪，用大頭針固定結腸組織，肉眼觀察大鼠結腸粘膜組織損傷情況。然后在病變最嚴重處剪取大鼠

6、結腸腸管1cm左右，用干冰速凍，放至-80℃冰箱冷凍保存。再留取大鼠結腸組織病變最明顯處組織若干，置于10％甲醛溶液中后固定48小時以上，再將結腸組織修成1×0.5cm的小塊，梯度酒精脫水，經石蠟包埋后，組織橫切片，用涂有多聚賴氨酸的載玻片撈片后，送遼寧中醫(yī)藥大學教學實驗中心檢測。
　　 結果：
　　 1．大鼠一般狀態(tài)
　　 潰結安康湯組、補脾益腸丸組、SASP組：經潰結安康湯、補脾益腸丸、SASP灌胃給藥10d

7、，各組大鼠精神狀態(tài)明顯好轉，毛發(fā)略顯光澤，活動量增加，進食量明顯增加，大便性狀有好轉，膿血便逐漸減少。
　　 21d后治療各組大鼠上述癥狀均有顯著改善，粘液、膿血便明顯減少，但與正常組比較，上述癥狀仍然略差，其中潰結安康湯組和SASP組恢復最好；模型組大鼠仍可見懶動、食量少、便稀、皮毛不澤等表現(xiàn)。
　　 2．肉眼觀察
　　 模型組大鼠結腸粘膜組織損傷肉眼觀積分與正常組比較，肉眼觀積分明顯增高，經統(tǒng)計學處理，具有統(tǒng)

8、計學意義；潰結安康湯組、補脾益腸丸組、SASP組與模型組比較，經統(tǒng)計學處理，肉眼觀積分明顯下降，具有統(tǒng)計學意義；潰結安康湯組與補脾益腸丸組比較，肉眼觀積分下降，經統(tǒng)計學處理，具有統(tǒng)計學意義；潰結安康湯組與SASP組比較，肉眼觀積分無明顯差異，經統(tǒng)計學處理，無統(tǒng)計學意義。
　　 3．光學顯微鏡觀察
　　 模型組大鼠結腸組織病理積分與正常組比較，病理積分明顯升高，經統(tǒng)計學處理，具有統(tǒng)計學意義；潰結安康湯組、補脾益腸丸組、SA

9、SP組與模型組比較，病理積分明顯下降，經統(tǒng)計學處理，具有統(tǒng)計學意義；潰結安康湯組與補脾益腸丸組比較，病理積分下降，經統(tǒng)計學處理，具有統(tǒng)計學意義；潰結安康湯組與SASP組比較，病理積分無明顯差異，經統(tǒng)計學處理，無統(tǒng)計學意義。
　　 4．大鼠腸電圖
　　 模型組腸電圖出現(xiàn)雙向改變，與正常組比較，腸電圖頻率明顯增快、幅值明顯增大，經統(tǒng)計學處理，具有統(tǒng)計學意義；潰結安康湯組、補脾益腸丸組、SASP組與模型組比較，腸電圖頻率明顯下

10、降、振幅明顯下降，經統(tǒng)計學處理，具有統(tǒng)計學意義；潰結安康湯組腸電圖與補脾益腸丸組比較，腸電圖頻率下降、振幅下降，經統(tǒng)計學處理，具有統(tǒng)計學意義；潰結安康湯組與SASP組比較，腸電圖頻率下降，經統(tǒng)計學處理，具有統(tǒng)計學意義，而腸電圖振幅下降無明顯差異，經統(tǒng)計學處理，無統(tǒng)計學意義。
　　 5．氧自由基
　　 模型組結腸組織氧自由基與正常組比較，丙二醛（MDA）含量明顯升高、超氧化物歧化酶（SOD）活性明顯降低，經統(tǒng)計學處理，具有

11、統(tǒng)計學意義；潰結安康湯組、補脾益腸丸組、SASP組與模型組比較，MDA含量明顯下降、SOD活性明顯增強，經統(tǒng)計學處理，具有統(tǒng)計學意義；潰結安康湯組與補脾益腸丸組比較，MDA含量下降、SOD活性增強，經統(tǒng)計學處理，具有統(tǒng)計學意義；潰結安康湯組與SASP組比較，MDA含量下降，經統(tǒng)計學處理，具有統(tǒng)計學意義，而SOD活性差異不大，經統(tǒng)計學處理，無統(tǒng)計學意義。
　　 6．炎性細胞因子
　　 模型組結腸組織炎性細胞因子與正常組比較

12、，致炎細胞因子IL-1β、TNF-α含量均明顯增高，IL-1β、TNF-α的蛋白表達也均明顯增高，經統(tǒng)計學處理，具有統(tǒng)計學意義，抗炎細胞因子IL-10含量明顯下降，其蛋白表達也明顯下降，經統(tǒng)計學處理，具有統(tǒng)計學意義。潰結安康湯組、補脾益腸丸組、SASP組與模型組比較，IL-1β、TNF-α含量均明顯下降，IL-1β、TNF-α的蛋白表達也均明顯下降，經統(tǒng)計學處理，具有統(tǒng)計學意義，IL-10含量明顯升高，其蛋白表達也明顯升高，經統(tǒng)計學處理

13、，具有統(tǒng)計學意義；潰結安康湯與補脾益腸丸組比較，IL-1β、TNF-α含量均下降，IL-1β、TNF-α的蛋白表達也均下降，經統(tǒng)計學處理，具有統(tǒng)計學意義，IL-10含量升高，其蛋白表達也升高，經統(tǒng)計學處理，具有統(tǒng)計學意義；潰結安康湯組與SASP組比較，IL-1β含量和IL-1β蛋白表達均差異不大，經統(tǒng)計學處理，無統(tǒng)計學意義，TNF-α含量和TNF-α蛋白表達均下降，經統(tǒng)計學處理，具有統(tǒng)計學意義，IL-10含量和IL-10蛋白表達均升高，

14、經統(tǒng)計學處理，具有統(tǒng)計學意義。
　　 7．表皮生長因子
　　 模型組結腸組織表皮生長因子與正常組比較，EGF含量明顯下降，EGFmRNA光密度明顯下降、EGFmRNA強度/內參明顯下降，經統(tǒng)計學處理，具有統(tǒng)計學意義；潰結安康湯組、補脾益腸丸組、SASP組與模型組比較，EGF含量明顯升高，EGFmRNA光密度明顯升高、EGFmRNA強度/內參明顯升高，經統(tǒng)計學處理，具有統(tǒng)計學意義；潰結安康湯組與補脾益腸丸組，EGF含量升高

15、，EGFmRNA光密度升高、EGFmRNA強度/內參升高，經統(tǒng)計學處理，具有統(tǒng)計學意義。潰結安康湯組與SASP組比較，EGF含量升高，EGFmRNA光密度升高、EGFmRNA強度/內參升高，經統(tǒng)計學處理，具有統(tǒng)計學意義。
　　 結論：
　　 1．肉眼觀察潰瘍性結腸炎大鼠模型有程度不同的粘膜的充血、水腫、糜爛和潰瘍，光學顯微鏡下見結腸各層組織出現(xiàn)炎性細胞浸潤，證明潰瘍性結腸炎模型制作成功。
　　 2．潰結安康湯對潰

16、瘍性結腸炎大鼠模型具有顯著的減輕一般狀態(tài)、減輕粘膜的充血、水腫、促進潰瘍愈合，促進炎性細胞吸收的作用。
　　 3．潰結安康湯對潰瘍性結腸炎大鼠模型腸電圖頻率和振幅有明顯降低的作用，從而減輕腸道運動，使腹瀉減輕。
　　 4．潰結安康湯對潰瘍性結腸炎大鼠模型可以增加結腸組織SOD活性，清除氧自由基，抑制脂質過氧化反應，降低MDA含量，減輕結腸組織損傷。
　　 5．潰結安康湯對潰瘍性結腸炎大鼠模型通過下調致炎細胞因子和