中藥重樓皂苷的分離、結(jié)構(gòu)鑒定及生物轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、本論文研究了新月彎孢霉(Curvularia lunata3.4381)生物轉(zhuǎn)化重樓甾體皂苷單體PI的生物反應(yīng)，得到的新化合物以達(dá)到減毒作用?？疾炝酥貥窃碥仗崛》蛛x純化的最佳工藝以及重樓皂苷的體外藥理活性，并討論了重樓皂苷化合物的結(jié)構(gòu)-藥效關(guān)系，重點(diǎn)從可轉(zhuǎn)化甾體化合物的菌種中篩選出新月彎孢霉，該菌可對重樓皂苷PI選擇性的進(jìn)行水解，從而到達(dá)減毒的目的。此外對新月彎孢霉的培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化。
　　 首先，通過正交試驗確定重樓總皂苷的提取

2、工藝，同時對比了7種不同型號的大孔吸附樹脂的靜態(tài)吸附條件，確定采用樹脂的型號。重樓總皂苷的提取工藝為在微沸狀態(tài)下，4倍量的70％己醇，2 h/次回流提取3次。經(jīng)過驗證實驗，皂苷提取率達(dá)到80.80％，工藝穩(wěn)定，重現(xiàn)性好。通過靜態(tài)吸附條件的考察確定選用HP-20型號樹脂，并確定了該樹脂的動態(tài)條件pH自然的條件下，按3:1的上樣量以2 Bv/h流速進(jìn)行吸附，吸附完全后先用10％-20％的乙醇先洗脫除雜，再用70％的乙醇洗脫得到重樓總皂苷。<

3、br>　　 其次，通過提取出來的6種甾體類皂苷，討論了重樓皂苷化合物的結(jié)構(gòu)-藥效關(guān)系。皂苷元C-3位連接糖鏈時，糖的數(shù)目、連接位置及組成類型對其生物活性都起著至關(guān)重要的作用，其中化合物1-4是由葡萄糖和鼠李糖組成糖鏈，末端鼠李糖連接在葡萄糖的2位時，細(xì)胞毒活性明顯強(qiáng)于連在4位上；此外，從組成皂苷的糖的類型上看，糖鏈數(shù)目相同的情況下，含有鼠李糖較多的皂苷細(xì)胞毒活性更強(qiáng)一些。
　　 再次，重點(diǎn)對可轉(zhuǎn)化重樓皂苷PI的菌種進(jìn)行了篩選了

4、。選用了黑根酶、赭曲霉、雷斯青霉、簡單節(jié)桿菌和新月彎孢霉對重樓皂苷PI進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化，通過HPLC發(fā)現(xiàn)新月彎孢霉可對重樓皂苷PI發(fā)生生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物經(jīng)過C-NMR、H-NMR確定水解掉了C-3鼠李糖。通過藥理作用證明了產(chǎn)物較重樓皂苷PI細(xì)胞毒活性有明顯的降低。
　　 最后，通過單因素試驗對新月彎孢霉搖瓶轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基優(yōu)化，確定了轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基的最適碳源為蔗糖，最適氮源為酵母膏和硫酸銨。通過響應(yīng)面確定培養(yǎng)基優(yōu)化條件，即蔗糖濃度為7.8