桔梗、黨參內生菌的人參皂苷生物轉化活性研究.pdf

1、人參為我國傳統中藥材，其主要活性成分為人參皂苷，由于稀有人參皂苷分子量小，生物利用度高，細胞膜滲透性強，具有顯著的藥理活性，但因其在天然植物中不存在或含量很低，限制了應用。近年來，內生菌在生物轉化上的應用已引起人們的廣泛關注，因內生菌與宿主植物長期共同進化，可形成各種胞外酶，促進代謝產物的積累和生物合成。本研究的目的是從含三萜類成分的桔梗、黨參內獲取具有人參皂苷生物轉化活性的內生菌。
　　本研究從黨參和桔梗中共分離101種內生菌，

2、篩選出47種產β-葡萄糖苷酶內生菌。通過單體皂苷轉化實驗，挑選出轉化活性顯著的三株高效菌株，命名為內生菌JG09、JG10和D19。結合形態(tài)觀察和分子學鑒定，對高效菌株鑒定，根據測序結果構建系統發(fā)育樹，結果表明：內生菌 JG09屬于 Lucteibacter屬；內生菌JG10屬于Luteibacter rhizovicinus屬；內生菌D19藤黃色桿菌屬（Dyella）。在人參根總皂苷轉化實驗中，以人參根總皂苷為底物，優(yōu)化發(fā)酵條件。內生

3、菌JG09的最佳條件：LL培養(yǎng)基，pH為4.0，稀有人參皂苷C-K、Rh1和F2的最大產率分別為16％、10%和35%；內生菌JG10的最佳條件：水為培養(yǎng)基，pH為4.0，稀有人參皂苷C-K、Rh1和F2的最大產率分別為10%、6%和22%；內生菌D19的最佳條件：水為培養(yǎng)基，pH為5.0，稀有人參皂苷C-K、Rh1和F2的最大產率分別為17%、8%和30%。在人參主皂苷轉化實驗中，結合TLC和HPLC分析法探究內生菌JG09對單體皂苷

4、的轉化路徑，分析稀有人參皂苷來源。結果表明：稀有人參皂苷C-K是由內生菌對人參二醇類皂苷Rb1、Rb2、Rc和Rd的作用產生，稀有人參皂苷Rh1是由內生菌人參三醇類皂苷Rg1的作用產生。內生菌JG09對單體皂苷的轉化路徑為：Rb1→Rd→F2→C-K；Rb2→C-O→C-Y→C-K；Rc→C-Mc1→C-Mc→C-K；Rd→F2→C-K；Rg1→Rh1。在人參皂苷Rb1轉化實驗中，比較內生菌JG09、JG10和D19的轉化活性。結果如下