脂肪來源干細胞移植治療心肌梗死大鼠的實驗研究.pdf

1、[目的]研究脂肪來源干細胞移植治療心肌梗死的可行性。
　　 [方法]1、脂肪來源干細胞的培養(yǎng)和誘導分化：由SD大鼠的腸系膜脂肪獲得脂肪來源間充質(zhì)干細胞，培養(yǎng)后用10μmol·1-1濃度的5氮雜胞苷(5-azacytidine)誘導，經(jīng)透射電鏡、掃描電鏡、免疫組化等檢測誘導后細胞的變化。2、脂肪來源干細胞的標記：超小超順磁性氧化鐵(ultrasmall superparamagnetic iron oxide，USPIO)40μg

2、Fe/ml、多聚賴氨酸(poly-1-lysine，PLL)1.5μg/ml與ADSCs共孵育培養(yǎng)，普魯士藍染色和透射電鏡驗證標記有效性，細胞培養(yǎng)液檢測VEGF濃度。3、心梗模型的建立及細胞移植術：采取結(jié)扎前降支的辦法建立SD大鼠心肌梗死模型，經(jīng)Micro-PET及MRI確認心梗。采取經(jīng)胸心外膜注射法將ADMSCs移植于心肌梗死區(qū)。4、脂肪來源干細胞在心肌梗死區(qū)的存活及對實驗動物心功能的影響。通過Micro-PET了解心梗后梗塞灶大小的

3、變化；1.5TMR掃描儀對實驗組(n=10)和空白對照組(n=10)以及心梗組大鼠(n=10)行磁共振成像，觀察心肌信號、計算并比較兩組大鼠的左室舒張末容積(left-ventricular end-diastolic volume，LVEDV)、左室收縮末容積(left-ventricular end-systolic volume，LVESV)及左室射血分數(shù)（left-ventricular ejection fraction，LV

4、EF），來了解移植前后心功能變化。病理組織學檢查觀察心肌結(jié)構(gòu)和標記ADSCs的分布。
　　 [結(jié)果]1、脂肪來源干細胞經(jīng)10pmol·1-1濃度的5氮雜胞苷(5-azacytidine)誘導后，透射電鏡可見到明顯肌絲，掃描電鏡可看到細胞呈現(xiàn)心肌細胞樣外觀變化，免疫組化可見到誘導后細胞為肌紅蛋白抗體所著染。2、普魯士藍染色顯示USPIO標記脂肪來源干細胞的陽性率＞99％，透射電鏡下可見黑色氧化鐵顆粒位于細胞溶酶體內(nèi)，細胞培養(yǎng)液可以

5、檢測到VEGF。3、開胸結(jié)扎冠脈前降支成功構(gòu)建心梗模型，實驗組大鼠心臟于Micro-PET下行18F-FDG及68Ga-RGD顯像顯示心尖部無血流灌注，無心肌存活；移植細胞后梗塞區(qū)面積減小，有血管再生。MR檢查顯示FIESTA和FSPGR序列圖像上可見左室前壁內(nèi)發(fā)現(xiàn)信號降低和室壁運動異常，并于2DMDE序列圖像上發(fā)現(xiàn)實驗組心肌內(nèi)出現(xiàn)延遲強化。心梗組LVEDV為：0.62±0.37ml，LVESV為0.28±0.36ml，LVEF為40.

6、57±3.03％，移植USPIO標記的ADSCs細胞組LVEDV為：0.51±0.31ml，LVESV為0.27±0.38ml，LVEF為50.94±3.59％，以上數(shù)據(jù)除LVESV外心梗組均低于移植細胞組，有顯著差異(P＜0.05)，而兩組之間LVESV無明顯差異(P≥0.05)。空白對照組的LVEDV為：0.44±0.30ml，LVESV為0.20±0.23ml，LVEF為62.84±3.65％，與移植USPIO標記的ADSCs細胞