抗Ⅳ型膠原酶單域抗體與力達霉素構(gòu)建的基因工程強化融合蛋白及其抗腫瘤活性研究.pdf

1、腫瘤靶向性治療藥物的成功發(fā)展在某種程度上依賴于治療藥物的位點特異性輸送和被輸送藥物的生物活性.單抗一直被用來給予其他無選擇性的細胞毒藥物諸如毒素、放射性核素的選擇能力.但是單抗的大分子使其在實際應(yīng)用中受到諸多限制.來源于小鼠的單克隆抗體3G11具有特異性結(jié)合Ⅳ型膠原酶的特性,以其為基礎(chǔ)構(gòu)建導向藥物取得了較好的療效.為了獲得更加小型化的抗體片段和腫瘤靶向性免疫治療藥物,本研究分別構(gòu)建了抗Ⅳ型膠原酶單抗3G11的單鏈抗體及單域抗體與力達霉素

2、的基因工程融合蛋白,并分別對它們的活性進行了系列研究.一、抗Ⅳ型膠原酶單鏈抗體3G11-scFv在大腸桿菌中的表達、純化及活性研究Ⅳ型膠原酶是腫瘤細胞發(fā)生侵襲與轉(zhuǎn)移的重要分子基礎(chǔ),也是抗癌藥物的新靶點.本研究首先通過PCR擴增得到單鏈抗體基因,將其克隆入質(zhì)粒pET-30(+)中,構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pET-scFv.經(jīng)酶切鑒定和序列測定后,將pET-scFv轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21star(DE3)中,進行誘導表達.本實驗提供了一種在大腸桿菌

3、中高效表達活性單鏈抗體的方法,同時為抗Ⅳ型膠原酶單鏈抗體3G11-scFv作為小型化的單抗導向藥物的載體提供了依據(jù)和可行性.二、單抗3G11的重鏈可變區(qū)單域抗體與力達霉素構(gòu)建的基因工程強化融合蛋白及其抗腫瘤活性研究單域抗體(single domain antibody)是抗體的最小功能結(jié)合單位,相當于人抗體的重鏈或輕鏈可變區(qū)(VH/VL),是繼全抗、Fab、scFv之后的新一代的治療抗體.單域抗體具有傳統(tǒng)抗體和小分子藥物的雙重優(yōu)勢,作為

4、腫瘤靶向藥物的載體有著誘人的前景.大分子肽類抗腫瘤抗生素力達霉素(1idamycin,LDM,又稱C1027)具有細胞毒作用強、體內(nèi)抗腫瘤活性高的特點,是單抗導向藥物的理想"彈頭".力達霉素由輔基蛋白(LDP)和活性烯二炔發(fā)色團(active enediyne,AE)組成.LDP和AE可拆分和重建,因此可基因重組單域抗體片段和輔基蛋白,然后加入發(fā)色團進行分子重建產(chǎn)生更加小型的單抗導向藥物.三、單抗3G11的輕鏈可變區(qū)單域抗體與力達霉素構(gòu)