TNF-α對巨噬細胞源泡沫細胞ABCA1表達的影響.pdf

1、動脈粥樣硬化(Artherosclerosis，AS)作為一種慢性炎癥性疾病，已經(jīng)成為世界范圍內(nèi)死亡率最高的疾病之一。巨噬細胞能啟動脂質(zhì)條紋形成，在動脈粥樣硬化病理過程中具有重要作用。脂質(zhì)條紋主要由巨噬細胞源泡沫細胞構成，而巨噬細胞泡沫化則是由胞內(nèi)脂質(zhì)代謝及轉運紊亂導致。巨噬細胞膽固醇穩(wěn)態(tài)的調(diào)控涉及多種因子，包括清道夫受體、參與膽固醇代謝的酶類以及膽固醇轉運蛋白，如 ATP結合盒轉運蛋白(ABCA1、ABCG1和ABCG4等)和清道夫受

2、體 B1(scavenger receptor B1，SR-B1)。巨噬細胞質(zhì)膜上的清道夫受體包括清道夫受體 A(scavenger receptor A，SR-A)和CD36，他們可以介導修飾脂質(zhì)特別是氧化 LDL(ox-LDL)的攝取。ox-LDL在溶酶體中降解為游離膽固醇或被修飾成無活性的膽固醇酯。ABCA1能夠?qū)麅?nèi)過剩的游離膽固醇傳遞給 apoA-I或 apoE，從而促進膽固醇外流，抑制巨噬細胞泡沫化。增加 ABCA1的表達具

3、有抗 AS作用。近幾年研究顯示，過氧化物酶體增殖激活受體γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ，PPARγ)和核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)在調(diào)控巨噬細胞炎癥和膽固醇穩(wěn)態(tài)方面發(fā)揮著重要作用。作為一種重要的炎癥因子，腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)很可能具有調(diào)控泡沫細胞 ABCA1表達的功能。
　　本實驗

4、主要研究促炎因子 TNF-α對ABCA1表達的調(diào)控作用，并且闡述 PPARγ與NF-κB之間是否存在相互作用、參與 TNF-α對ABCA1表達的調(diào)控。分離并純化 TNF-α-/-型和野生型(WT型)C57BL/6J小鼠腹腔巨噬細胞，與50μg/ml ox-LDL孵育48h以誘導巨噬細胞泡沫化。實驗分為兩組對照組，一組泡沫細胞僅添加外源 TNF-α(10ng/ml)處理24h，另一組使用ox-LDL(50μg/ml)和TNF-α(10ng

5、/ml)共同處理24h。應用熒光免疫組織化學方法研究TNF-α對巨噬細胞源泡沫細胞內(nèi) ABCA1表達的影響，以及該過程可能涉及的信號通路間的相互作用。
　　實驗結果顯示:未泡沫化前，TNF-α-/-型小鼠腹腔巨噬細胞內(nèi) ABCA1表達量極少，與WT型無明顯差別。加入 ox-LDL誘導泡沫化后，ABCA1表達量明顯增加，但兩種基因型之間無明顯差別。在泡沫細胞中加入外源 TNF-α后，ABCA1表達量明顯下降，因而推測 TNF-α對A

6、BCA1表達的抑制作用與 TNF-α濃度相關。巨噬細胞 NF-κB的表達量在泡沫化后無顯著增加，向泡沫細胞中添加 TNF-α可激活 NF-κB核易位，ox-LDL對NF-κB核易位也有一定刺激作用。ox-LDL可刺激 PPARγ的表達和核易位，并且這種作用與時間呈正相關；TNF-α對泡沫細胞 PPARγ的激活有一定抑制作用，但并不顯著。
　　TNF-α可通過激活 NF-κB通路顯著降低泡沫細胞中ABCA1表達水平，但 PPARγ并