IL-1β和MMP-13在兔骨關節(jié)炎模型軟骨和滑流中的表達及意義.pdf

1、目的：評價兔膝關節(jié)內側半月板損傷制作骨關節(jié)炎模型方法的可行性，探討白介素-1beta(IL-1β)和金屬蛋白酶-13(MMP-13)在兔骨關節(jié)炎模型軟骨和滑液中的作用機制。
　　 方法
　　 1新西蘭大白兔40只，月齡4-6月，重量1.8-2.5kg。雌雄不限，由新鄉(xiāng)醫(yī)學院實驗動物中心提供，隨機分為實驗組和對照組，實驗組30只，對照組10只。以右側后膝關節(jié)作為手術側。實驗組在內側半月板游離緣體部與后角交界處造成0.7×0

2、.3cm全層裂傷的無血運區(qū)損傷，對照組僅打開關節(jié)腔；實驗組于術后2、6、12周各處死10只。對照組術后12周處死。
　　 2觀察實驗組2周、6周、12周及對照組12周動物的股骨髁關節(jié)軟骨的病理變化，并根據(jù)Pelletier JP方法行股骨髁關節(jié)軟骨病變評分；HE染色；用免疫組化方法檢測IL-1β和MMP-13的表達情況；用病理圖像分析系統(tǒng)，計算各組軟骨細胞中IL-1β和MMP-13表達的細胞分數(shù)。分別抽取實驗組2周、6周、12周

3、及對照組12周動物關節(jié)腔內滑液后，用酶聯(lián)免疫吸附法測定關節(jié)液中IL-1β和MMP-13的含量。采用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計學分析。
　　 結果
　　 1實驗2周時大體觀察和病理觀察即可見軟骨退變；6周和12周時退變進一步加重，對照組未見明顯軟骨退變，不同時間點關節(jié)軟骨評分有統(tǒng)計學差異。
　　 2 HE染色：對照組關節(jié)軟骨細胞排列規(guī)則，分層明顯、均勻，未見空泡細胞；實驗組2周時軟骨細胞水腫；實驗組6周時軟

4、骨細胞分層混亂，細胞腫脹；實驗組12周時軟骨細胞稀疏，部分軟骨細胞簇集、水腫，且可見大量空泡細胞。
　　 3免疫組織化學：(1)IL-1β在兩組中均有表達，實驗組2周細胞分數(shù)比對照組稍高，無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；實驗組6、12周細胞分數(shù)比對照組細胞分數(shù)明顯增高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；實驗組6、12周細胞分數(shù)比實驗組2周細胞分數(shù)明顯增高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；實驗組12周細胞分數(shù)比實驗組6周細胞分數(shù)明

5、顯增高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(2)MMP-13在對照組關節(jié)軟骨細胞中未見表達，實驗組的關節(jié)軟骨細胞中可見MMP-13蛋白的表達，實驗組6周細胞分數(shù)比實驗組2周細胞分數(shù)明顯增高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；實驗組12周細胞分數(shù)比實驗組6周細胞分數(shù)明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；實驗組12周細胞分數(shù)比實驗組2周細胞分數(shù)高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 4.ELISA：實驗組第2周關節(jié)滑液中