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文檔簡介
1、目的:評價兔膝關節(jié)內側半月板損傷制作骨關節(jié)炎模型方法的可行性,探討白介素-1beta(IL-1β)和金屬蛋白酶-13(MMP-13)在兔骨關節(jié)炎模型軟骨和滑液中的作用機制。
方法
1新西蘭大白兔40只,月齡4-6月,重量1.8-2.5kg。雌雄不限,由新鄉(xiāng)醫(yī)學院實驗動物中心提供,隨機分為實驗組和對照組,實驗組30只,對照組10只。以右側后膝關節(jié)作為手術側。實驗組在內側半月板游離緣體部與后角交界處造成0.7×0
2、.3cm全層裂傷的無血運區(qū)損傷,對照組僅打開關節(jié)腔;實驗組于術后2、6、12周各處死10只。對照組術后12周處死。
2觀察實驗組2周、6周、12周及對照組12周動物的股骨髁關節(jié)軟骨的病理變化,并根據(jù)Pelletier JP方法行股骨髁關節(jié)軟骨病變評分;HE染色;用免疫組化方法檢測IL-1β和MMP-13的表達情況;用病理圖像分析系統(tǒng),計算各組軟骨細胞中IL-1β和MMP-13表達的細胞分數(shù)。分別抽取實驗組2周、6周、12周
3、及對照組12周動物關節(jié)腔內滑液后,用酶聯(lián)免疫吸附法測定關節(jié)液中IL-1β和MMP-13的含量。采用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計學分析。
結果
1實驗2周時大體觀察和病理觀察即可見軟骨退變;6周和12周時退變進一步加重,對照組未見明顯軟骨退變,不同時間點關節(jié)軟骨評分有統(tǒng)計學差異。
2 HE染色:對照組關節(jié)軟骨細胞排列規(guī)則,分層明顯、均勻,未見空泡細胞;實驗組2周時軟骨細胞水腫;實驗組6周時軟
4、骨細胞分層混亂,細胞腫脹;實驗組12周時軟骨細胞稀疏,部分軟骨細胞簇集、水腫,且可見大量空泡細胞。
3免疫組織化學:(1)IL-1β在兩組中均有表達,實驗組2周細胞分數(shù)比對照組稍高,無統(tǒng)計學意義(P>0.05);實驗組6、12周細胞分數(shù)比對照組細胞分數(shù)明顯增高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);實驗組6、12周細胞分數(shù)比實驗組2周細胞分數(shù)明顯增高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);實驗組12周細胞分數(shù)比實驗組6周細胞分數(shù)明
5、顯增高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(2)MMP-13在對照組關節(jié)軟骨細胞中未見表達,實驗組的關節(jié)軟骨細胞中可見MMP-13蛋白的表達,實驗組6周細胞分數(shù)比實驗組2周細胞分數(shù)明顯增高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);實驗組12周細胞分數(shù)比實驗組6周細胞分數(shù)明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);實驗組12周細胞分數(shù)比實驗組2周細胞分數(shù)高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
4.ELISA:實驗組第2周關節(jié)滑液中
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