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文檔簡介
1、目的：將人腦源性神經生長因子(Brain-derivedneurotrophicfactor，BDNFl基因在真核及原核表達系統(tǒng)中進行重組表達，并檢測所表達蛋白的功能，為開發(fā)高活性的hBDNF基因重組蛋白和基因治療載體奠定基礎。 方法：將由本科室構建和保存的人BDNF基因真核表達載體pTrace，M—EV／V5-His-hBDNF鑒定后導入CHO細胞中進行表達；同時將本科室所保存的質粒pBV220-BDNF的BDNF基因酶切后重
2、組到表達效果更高的原核載體pET3．0a+上，鑒定后導入原核細胞中進行表達。并用SDS-PAGE、RT-PCR、Western-blot、MTT法檢測促PCI2細胞生長等方法進行其抗原性和生物學活性的檢測。 結果：原核載體重組構建成功。原核和真核表達載體分別在大腸桿菌和CHO細胞中均獲成功表達。在大腸桿菌中表達的包涵體蛋白約占菌體總蛋白的37．9％，通過透析復性后，獲得具有活性的表達蛋白。該復性后蛋白和CHO細胞表達產物均具有較
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