CT-1致心肌細胞肥大的機制探討及相關信號轉導通路的研究.pdf

1、背景與目的：心肌肥大是心肌細胞受到各種肥大刺激因子作用后產生的一個復雜的病理生理過程，是機體為適應過量負荷產生的一種適應性、保護性措施。在這個過程中常常伴有心肌細胞體積增大、心肌纖維增生和胚胎基因的重新激活。由于心肌細胞出生之后不久即失去分裂增殖能力，所以這一過程并不伴有心肌細胞數目的增加。心肌肥大持續(xù)發(fā)展最終將導致心功能衰竭。 本課題將以乳鼠心肌細胞為研究對象，觀察CT-1作用下GATA4轉錄表達和結合活性的變化，分析其與其他

2、肥大刺激因子的差異機制及其獨特的致肥大機理。同時單獨或者聯(lián)合應用CT-1相關信號轉導通路阻斷劑進一步分析信號轉導在這一過程中的作用。 材料和方法：應用半定量RT-PCR及EMSA技術，測定CT-1對大鼠心肌細胞GATA4mRNA及結合活性表達的時間、劑量依賴影響。通過單獨或聯(lián)合應用Parthenolide(STAT3通路阻斷劑)、U-0126(ERK通路阻斷劑)及LY294002(PI3K通路阻斷劑)，分析GATA4兩指標的表達

3、變化闡述三條信號通路在該過程中發(fā)揮的作用。 結果：1CT-1對GATA4結合活性的表達影響時間依賴實驗，0.1nmol/L的CT-1刺激后，GATA4結合活性在刺激10min后開始增加，到60min時達到最大值，180min下降至刺激前水平。劑量依賴實驗，GATA4結合活性在0.01nmol/L時，灰度值較無刺激組略增高，0.1nmol/L時灰度值達到最高值，以后強度略減弱并維持該水平。()CT-1對GATA4mRNA表達影響時

4、間依賴實驗，0.1nmol/L的CT-1刺激后，GATA4mRNA表達是在3h出現(xiàn)顯著性增加，刺激6h以后均表現(xiàn)為極顯著性差異(P＜0.01)，6h以后各組間無顯著性差別；劑量依賴實驗，GATA4mRNA表達在CT-1的刺激濃度為0.01nmol/L以上時各組均表現(xiàn)為極顯著性增加(P＜0.01)3通路實驗結果顯示，U0126可以增加CT-1刺激后GATA4mRNA(P＜0.05)的表達和結合活性的增加，Parthenolide可以顯著降

5、低GATA4mRNA(P＜0.01)和結合活性的表達，應用LY-294002后GATA4相關指標與對照組無明顯差異。此外，Parthenolide可以抑制由U0126引起的GATA4mRNA表達的增加(P＜0.01)及結合活性的增高。 結論：1CT-1可引起大鼠心肌轉錄因子GATA4結合活性的表達增強，并且作用時間較早且迅速；2CT-1可引起大鼠心肌轉錄因子GATA4mRNA表達增強，發(fā)揮作用的時間較結合活性的表達晚，持續(xù)時間長