尿液中PCA3mRNA和融合基因TMPRSS2：ERGmRNA檢測在前列腺癌早期診斷中的應用.pdf

1、目的：
　　 探討前列腺按摩后尿液中PCA3mRNA和融合基因TMPRSS2:ERG亞型TlE4mRNA的定量檢測聯(lián)合診斷早期前列腺癌的價值。
　　 方法：
　　 1、根據(jù)Genbank中的PCA3mRNA的參考序列(AF1003907),設計上下游引物及MGB探針,建立探針法實時定量逆轉錄PCR的檢測方法學,用相對定量的研究方法分析實驗結果。尿液PCA3mRNA的含量經(jīng)PSA mRNA校正后用PCA3 mRNA

2、/PSA mRNA比值表示,采用2￣△Ct方法計算,△Ct=CtPCA3mRNA￣CtPSA mRNA。
　　 2、根據(jù)Genbank中TMPRSS2mRNA/(NM_005656.2)ERGmRNA/(NM＿004449.3)序列,設計上下游引物及MGB探針,建立探針法實時定量逆轉錄PCR擴增融合基因TMPRSS2:ERG亞型TlE4mRNA的檢測方法學,用相對定量的研究方法分析實驗結果。尿液TlE4mRNA的含量經(jīng)PSA m

3、RNA校正后用TlE4mRNA/PSA mRNA比值表示,采用2￣△Ct方法計算,△Ct=Ct TlE4mRNA-CtPSAmRNA。
　　 3、用建立的方法學對37例(年齡46～84歲,平均73±7歲)前列腺癌(PCa)患者和53例(年齡55～91歲,平均69±9歲)前列腺良性增生(BPH)患者前列腺按摩后尿液PCA3mRNA/PSAmRNA及TlE4mRNA/PSAmRNA比值進行檢測。
　　 4、分析尿液PCA3m

4、RNA和TMPRSS2:ERG融合體亞型TlE4mRNA含量各自對PCa的診斷價值及其聯(lián)合診斷價值。
　　 結果：
　　 1、成功建立了熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應檢測TlE4mRNA和PCA3mRNA的方法,擴增產(chǎn)物經(jīng)測序分析也已證實為兩片段的的特異性產(chǎn)物。
　　 2、前列腺按摩后尿液TlE4mRNA/PSAmRNA及PCA3mRNA/PSAmRNA比值診斷PCa性能評價:尿液TlE4mRNA/PSAmRNA比值

5、診斷PCa的ROC曲線下面積(AUC)為0.802(95％CI:0.709～0.895)。取0.007為截斷值時,PCa組56.6％病例為陽性(30/53)；BPH組有5.4％為陽性(2/37),其診斷前列腺癌的敏感度(sensitivity)和特異度(specificity)為56.6％和94.6％,陽性預測值(PPV)為93.8％、陰性預測值(NPV)為60.3％、準確度為72.2％；PCA3mRNA/PSAmRNA比值診斷PCa的

6、ROC曲線下面積(AUC)為0.646(95％CI:0.533～0.758)取0.001為截斷值時,PCa組47.2％病例為陽性(25/53);BPH組有27.0％為陽性(10/37)；其診斷前列腺的敏感度和特異度分別為47.2％和73.0％,陽性預測值(PPV)為71.4％、陰性預測值(NPV)為49.1％、準確度為57.8％。
　　 3、PCA3mRNA和TlE4mRNA兩個指標聯(lián)合診斷前列腺癌的結果:兩指標聯(lián)合檢測的敏感度