針刺對腦出血急性期大鼠腦損傷及腦水腫拮抗作用的機理研究.pdf

1、目的：探討針刺對腦出血急性期腦損傷及腦水腫拮抗作用的機理。本課題通過觀察“百會”透“曲鬢”頭針療法對急性腦出血大鼠腦組織形態(tài)學及腦組織中GDNF、MMP-9、AQP-4和VEGF表達的影響來揭示對腦損傷及腦水腫拮抗作用的相關機理,為治療急性腦出血的臨床方法奠定實驗基礎。 方法：選取健康雄性Wistar大鼠320只(其中160只大鼠用于光鏡、電鏡、原位雜交和免疫組化測定,另160只大鼠只用于檢測腦水含量),隨機分為三組：模型組、針

2、刺組、西藥組,每組100只大鼠；每組再隨機分為6h、1d、2d、3d、7d五個亞組,每個亞組20只大鼠；制備腦出血模型；另設20只正常大鼠作為空白組。針刺組大鼠針刺患側(cè)“百會”透“曲鬢”穴。在光鏡和電鏡下觀察各組大鼠腦組織形態(tài)學改變；應用干-濕重法測定各組大鼠腦水含量；運用原位雜交及免疫組化等方法檢測各組大鼠腦組織中GDNF、MMP-9、AQP-4和VEGF陽性細胞的表達。 結(jié)果：1.光鏡下可見模型組血腫周圍腦組織壞死、水腫、炎

3、性細胞浸潤,神經(jīng)細胞核固縮、空泡化,毛細血管擴張、充血,3天時最嚴重。針刺組腦組織逐漸修復,水腫程度較輕,炎性細胞減少。西藥組與模型組比較,改變不顯著。2.電鏡下可見模型組神經(jīng)細胞腫脹,染色質(zhì)凝聚成塊狀或核成溶解狀,線粒體腫脹、空泡化,嵴斷裂,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張,多聚核糖體解聚,突觸結(jié)構(gòu)腫脹。針刺組較模型組神經(jīng)細胞腫脹減輕,線粒體結(jié)構(gòu)破壞較輕,突觸結(jié)構(gòu)較清晰。西藥組與模型組比較,改變不顯著。3.各造模組大鼠術(shù)后均出現(xiàn)不同程度的腦水腫現(xiàn)象。模

4、型組大鼠術(shù)后6h出現(xiàn)輕度腦水腫現(xiàn)象；3d腦水腫達高峰；7d仍有輕度腦水腫現(xiàn)象。針刺組較模型組和西藥組腦水腫程度減輕,與模型組比較在1d-7d時差異明顯(P<0.01);與西藥組比較在1d-3d時差異明顯(P<0.01)。西藥組較模型組腦水腫程度減輕,在1d-3d時差異明顯(P<0.01)。4.GDNF原位雜交方法檢測結(jié)果：各造模組大鼠術(shù)后均出現(xiàn)不同程度的GDNFmRNA陽性表達增多現(xiàn)象。模型組大鼠術(shù)后6h即出現(xiàn)較明顯的GDNFmRNA陽

5、性細胞表達增多現(xiàn)象；1d時達高峰；2d時呈現(xiàn)下降趨勢；7d時接近正常。針刺組GDNF的表達明顯高于模型組和西藥組,在相同時間點差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01),7d時仍有很高表達。西藥組與模型組比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。5.MMP-9免疫組化方法檢測結(jié)果：各造模組大鼠術(shù)后均出現(xiàn)不同程度的MMP-9陽性細胞表達增多現(xiàn)象。模型組大鼠術(shù)后6h即出現(xiàn)明顯的MMP-9表達增加；2d時達高峰；3d時出現(xiàn)緩慢下降；7d時MMP-9表

6、達仍高于空白組。針刺組MMP-9陽性細胞表達低于模型組和西藥組,與模型組比較在相同時間點均差異明顯(P<0.01);與西藥組比較在6h-2d時差異明顯(P<0.01)。西藥組MMP-9表達在1d-7d時低于模型組(P<0.01)。6.AQP-4免疫組化方法檢測結(jié)果：各造模組大鼠術(shù)后均出現(xiàn)不同程度的AQP-4陽性表達上升現(xiàn)象。模型組大鼠術(shù)后6h即出現(xiàn)AQP-4陽性細胞表達增多；3d時達高峰；7d時仍高于空白組。針刺組AQP-4表達低于模型

7、組和西藥組,在1d-3d時差異明顯(P<0.01)。西藥組與模型組比較,2d時稍有差異(P<0.05)。7.VEGF免疫組化方法檢測結(jié)果：各造模組大鼠術(shù)后均出現(xiàn)不同程度的VEGF陽性表達增多現(xiàn)象。模型組大鼠術(shù)后6h即出現(xiàn)大量的VEGF陽性細胞表達并出現(xiàn)第一個高峰；1d、2d出現(xiàn)緩慢下降態(tài)勢；3d突然增高并達峰值；7d時陽性表達仍高于空白組。在1d-3d時間點,針刺組VEGF的表達明顯低于模型組(P<0.01);在7d時間點,針刺組VEG

8、F陽性表達反而較模型組明顯增多(P<0.01)。西藥組與模型組比較,在7d時較模型組增多明顯(P<0.01)。 結(jié)論：1.“百會”透“曲鬢”頭針療法在腦出血急性期能明顯減輕神經(jīng)細胞損傷及超微結(jié)構(gòu)的破壞、減少炎性細胞浸潤、降低血腫周圍腦組織腦水腫程度,提示對腦組織損傷及腦水腫有拮抗作用。2.該方法可能在腦出血急性期通過促進內(nèi)源性GDNFmRNA表達、抑制內(nèi)源性MMP-9和AQP-4表達、早期抑制VEGF的表達并后期促進VEGF的表