ROCKⅡ在大鼠腦出血后血腫周圍組織中的表達及對出血后腦損傷的作用.pdf

1、目的: 觀察大鼠腦出血后血腫周圍腦組織中ROCKⅡ的表達規(guī)律及其在腦出血后腦損傷中的作用，ROCK特異性抑制劑Y-27632對大鼠腦出血后神經功能、腦水腫、血腦屏障和細胞凋亡的影響，RhoA抑制劑胞外酶C3(exoenzyme C3）及凝血酶抑制劑阿加曲班對ROCKⅡ表達的影響。
　　 方法: 取雄性SD大鼠，采自體血（50μl）注入右側尾狀核制作腦出血模型，于注射后各時間點（0.5h、6h、12h、24h、48h、72h、5d

2、）處死大鼠并取右側尾狀核，采用Western blot方法檢測出血側ROCKⅡ含量的動態(tài)變化。再取雄性SD大鼠，隨機分為假手術組（作為對照組，同側尾狀核內注射生理鹽水，S組），腦出血組（ICH組），exoenzyme C3組（C3組），Y-27632組，阿加曲班組(Arg組)。采自體血（50μl）注入右側尾狀核制作腦出血模型，C3、Y-27632、Arg組分別在出血后3h時經針道將exoenzyme C3(2μg/mL)、Y-27632

3、( 2.5μg/mL )、阿加曲班（0.5μg/mL）原位注射入血腫中。于注射后各時間點（0.5h,6h,12h,24h,48h,72h,5d）處死大鼠并取右側尾狀核，采用免疫組化方法檢測出血側ROCKⅡ的含量變化及分布。在出血后24h（ROCKⅡ表達高峰時間點）時采用干濕重法測腦組織含水量，TUNEL原位標記法檢測血腫周圍凋亡細胞數量，伊文思藍（EB）測血腦屏障（BBB）通透性，出血48h時HE染色法觀察炎性細胞浸潤將以上結果進行統計

4、學分析。
　　 結果: 在造模后0.5 h，各組病灶周圍即可見ROCKⅡ陽性細胞表達，ICH組、Arg組、C3組24 h達高峰，以后逐漸下降，但在12h后（包括12h）相應時間點Arg組、C3組的ROCKⅡ表達水平明顯低于ICH組（P＜0.01）。假手術組病灶周圍ROCK的表達水平均明顯低于腦出血組，且細胞著色淺，不同時間點并且沒有變化趨勢。腦出血組western-blotting蛋白條帶所顯示ROCKⅡ蛋白表達趨勢和免疫組化結

5、果一致。ICH組、Arg組、C3組、Y-27632組出血側腦組織含水量分別為83.63±0.55％、79.46±1.27％、80.10±1.07％、78.08±0.83％，Arg組、C3組、Y-27632組和ICH組比較差異有統計學意義；同Arg組、C3組、Y-27632組比較，ICH組血腫周圍組織中可見到更多TUNEL陽性細胞（P<0.01，C3組 P<0.05）及炎癥細胞，且腦組織EB含量高于Arg組、C3組、Y-27632組（P<