小鼠結腸癌EpCAM+-CD44+細胞對腫瘤區(qū)脈管生成的作用及三氧化二砷對其的影響.pdf

1、目的：研究小鼠大腸癌CT26細胞移植瘤EpCAM+/CD44+細胞對腫瘤脈管生成的作用。探討As2O3對人體大腸癌細胞SW620的作用機制，為As2O3應用于大腸癌的臨床治療提供理論基礎和實驗依據(jù)。
　　 方法：1．體外實驗：培養(yǎng)人大腸癌SW620細胞株，應用不同濃度的As2O3(1.0、2.0、4.0、8.0μmol/L)分別作用于細胞24h、48h、72h。用MTT法分別檢測各個時間不同濃度As2O3對細胞的抑制率；Hoec

2、hst33258熒光染色法觀察凋亡細胞的形態(tài)學變化；應用免疫細胞化學(PV法)檢測各實驗組細胞中MMP-9的表達。
　　 2．體內實驗：復蘇并大量培養(yǎng)擴增小鼠大腸癌CT26細胞，取對數(shù)生長期細胞制成細胞懸液在小鼠腋窩皮下接種。反復傳代兩三次后，建立小鼠皮下移植瘤模型。模型成功后，將小鼠隨機分為3組：生理鹽水組、As2O3低劑量治療組(治療劑量為1.0mg/kg·d)、As2O3高劑量治療組(治療劑量為2.0mg/kg·d)。連續(xù)

3、用藥10天，給藥期間每日觀察各組小鼠生活情況及移植瘤生長情況，末次用藥后24小時處死小鼠。分別測量各組小鼠體重、腫瘤重量和腫瘤體積，計算各組腫瘤抑制率；采用免疫組織化學(IHC)PV法檢測瘤組織EpCAM、CD44、VEGF-C、MMP-9、podoplanin、CD31、VEGFR-1和VEGFR-3的表達情況，并且計數(shù)微淋巴管密度(MLD)與微血管密度(MVD)。
　　 結果：1．體外實驗：(1)細胞增殖抑制實驗(MTT)顯

4、示：不同濃度的As2O3(1.0、2.0、4.0、8.0μmol/L)作用SW620細胞24、48、72h后，與實驗對照組(0μmol/LAs2O3)相比，細胞增殖受到不同程度的抑制。各組間及與陰性對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。不同濃度的As2O3對SW620的增殖抑制作用隨著As2O3濃度的升高和作用時間的延長越來越明顯，即呈時間-濃度效應依賴性。(2)Hoechst33258熒光染色法結果顯示：隨著藥物干預組As2O

5、3濃度的升高，熒光染色可見細胞核染色質凝聚、邊集、固縮、形成凋亡小體以及核碎裂的形態(tài)學改變。(3)免疫細胞化學結果顯示：各濃度藥物干預組中MMP-9陽性表達明顯降低，且隨著As2O3濃度增高，其降低作用越來越明顯。各組間及與陰性對照組相比，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 2．體內實驗：(1)與生理鹽水組相比，As2O3藥物干預組中小鼠的皮下移植瘤生長均受到不同程度的抑制，以高濃度組的抑制作用更為明顯(P＜0.05)。

6、生理鹽水組、As2O3低劑量組、As2O3高劑量組腫瘤的重量分別為1.21±0.33、0.75±0.20、0.47±0.21(g)。(2)免疫組織化學顯示：與生理鹽水組相比，各濃度藥物干預組中EpCAM、CD44、VEGF-C、MMP-9、podoplanin、CD31、VEGFR-1和VEGFR-3的表達均不同程度降低，各組間及與生理鹽水組相比，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),EpCAM、CD44與VEGF-C的表達均具有明顯的相

7、關性(P＜0.01)，VEGF-C與VEGFR-1和VEGFR-3的表達均具有明顯的相關性(P＜0.01)。
　　 結論：1.As2O3作用于大腸癌細胞的主要表現(xiàn)為抑制細胞增殖，促進細胞凋亡，降低細胞的侵襲能力，且在高濃度組中的表現(xiàn)更為明顯。2.EpCAM和CD44可以聯(lián)合應用作為大腸癌干細胞的重要標記物。3.As2O3可以抑制大腸癌中EpCAM、CD44、VEGF-C、MMP-9、podoplanin、CD31、VEGFR-1