RetroNectin對CIK細胞增殖、表型變化和殺傷活性影響的初步研究.pdf

1、目的：初步研究RetroNectin對CIK細胞增值、表性變化及殺傷活性的影響，并探討其可能機制。 方法：采集人外周血單個核細胞，標本分為兩組，對照組加入IFN-γ、IL-2、IL-1α、CD3mAb等細胞因子誘導(dǎo)其增殖，實驗組另外加入RetroNectin誘導(dǎo)，倒置顯微鏡下觀察培養(yǎng)過程中細胞形態(tài)變化，采用活細胞計數(shù)法觀察CIK細胞增殖，分別繪制細胞增值曲線；流式細胞術(shù)檢測CIK細胞培養(yǎng)過程中的表型變化；LDH法檢測CIK細胞對

2、腫瘤細胞K562細胞和PC-3細胞的殺傷活性；采用AnnexinV/PI染色，流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡情況；流式細胞技術(shù)檢測不同培養(yǎng)條件下第4d、7d、11d及14d的CIK細胞周期。 結(jié)果：PBMC在體外經(jīng)過多種細胞因子的誘導(dǎo)后，能大量擴增生成CIK細胞，培養(yǎng)14天，擴增倍數(shù)可達96.13±5.03倍；CIK細胞中的CD3<'+>CD8<'+>、CD3<'+>CD56<'+>細胞比例隨培養(yǎng)時間的延長較PBMC明顯增多；細胞的百分

3、率則逐漸下降； CIK細胞對K562細胞和PC-3細胞均有較強的殺傷活性，兩者相比較，差異無統(tǒng)計學意義，并且隨著誘導(dǎo)時間的延長，這種殺傷活性增強，在誘導(dǎo)培養(yǎng)的第14d殺傷活性最強。經(jīng)RetroNectin刺激14天后的RN-CIK細胞擴增倍數(shù)可達330.46±7.96倍，培養(yǎng)的第7天起明顯高于普通培養(yǎng)方法；自培養(yǎng)的第7天，RN-CIK細胞中的CD25±細胞比例較普通培養(yǎng)的CIK細胞明顯增多。但兩種培養(yǎng)方法對CIK細胞的CD3<'+>CD

4、8<'+>、CD3<'+>CD56<'+>、CD3<'+>CD4<'+>表型及細胞殺傷活性的影響無明顯差異。在培養(yǎng)的第11d，RN-CIK細胞與普通培養(yǎng)的CIK細胞凋亡率無明顯差異。S期細胞的比例隨所培養(yǎng)時間的延長逐漸升高，在培養(yǎng)的第7d達到最高，并且RN-CIK細胞中S期的細胞比例明顯高于普通培養(yǎng)的CIK細胞組。 結(jié)論： (1)體外應(yīng)用抗人CD3單抗、人重組IL-1α、人重組IFN-γ和人重組IL-2能誘導(dǎo)PBMC生成