雙靶點干預對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜VEGF和CTGF表達的影響.pdf

1、目的:
　　 1.在糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中，研究結締組織生長因子(connective tissue growthfactor, CTGF)和血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)基因表達隨時間變化，及透射電鏡下觀測大鼠視網(wǎng)膜微血管超微結構的變化。
　　 2.探討經玻璃體腔注射抗VEGF新藥lucentis和CTGF shRNA后，CTGF和VEGFmRNA表達水

2、平及視網(wǎng)膜微血管超微結構的改變。
　　 方法:
　　 1.將48只大鼠隨機分為糖尿病組（DM組）和正常對照組（CON組），在造模成功后8、10、12周取大鼠視網(wǎng)膜標本行逆轉錄實時定量PCR檢測VEGF和CTGF的基因表達變化。同時在各時點取各組大鼠眼杯，經戊二醛固定，透射電子顯微鏡觀察。
　　 2.根據(jù)實驗1結果，在造模后10周，將DM大鼠隨機分為lucentis單靶點干預組，CTGF shRNA單靶點干預組，l

3、ucentis和CTGF shRNA雙靶點干預組，未干預組，以及正常對照組。干預1周后取各組大鼠的視網(wǎng)膜標本，行實時定量PCR檢測VEGF和CTGF的基因表達及透射電鏡觀察。
　　 結果:
　　 1.實驗1:在第8周時DM組大鼠視網(wǎng)膜CTGF mRNA水平較正常組顯著增高(P=0.037)且一直持續(xù)到第12周(P=0.032，P=0.039)，而VEGF的mRNA水平在第10周較正常對照組開始升高，持續(xù)到12周，差異均有

4、統(tǒng)計學意義(P=0.043，P=0.036)。
　　 2.實驗1:CON組未見異常，DM組從第8周開始出現(xiàn)異常改變，表現(xiàn)為視網(wǎng)膜血管內皮細胞腫脹，向管腔突出，細胞核內異染色質凝集居邊，細胞質內線粒體明顯腫脹，粗面內質網(wǎng)呈池樣擴張，毛細血管基底膜增厚。且隨著病程延長，改變更加明顯，可見到閉鎖的毛細血管，以DM12組最為顯著。
　　 3.實驗2:Lucentis單靶點干預組，VEGF基因表達較DM未干預組顯著降低(P=0.0

5、14)，而CTGF表達較DM未干預組則顯著升高(P=0.048); CTGFshRNA單靶點干預組，CTGF mRNA水平降至與正常對照組相似(P=0.825)，而且VEGF mRNA表達也降低(P=0.026);雙靶點干預組，VEGF和CTGFmRNA較未干預組均明顯下調(P＜0.001，P=0.001)，與正常對照組無顯著區(qū)別(P=0.292，P=0.287)。
　　 4.實驗2:CON組視網(wǎng)膜毛細血管管腔平滑完整，內皮細胞

6、扁平緊貼于連續(xù)的基膜上。DM未干預組視網(wǎng)膜毛細血管內皮細胞水腫，異染色質邊集。毛細血管管腔狹窄。雙靶點干預組毛細血管腔較完整，內皮細胞稍水腫，周細胞清晰完整，超微結構接近于正常對照組。Lucentis和CTGF shRNA單靶點干預組仍可見視網(wǎng)膜毛細血管管腔狹窄，內皮細胞水腫，異染色質邊集，超微結構完整性明顯低于雙靶點干預組。
　　 結論:
　　 在早期DM大鼠視網(wǎng)膜內，VEGF和CTGF的基因表達即開始升高，且CTGF