骨橋蛋白在大腸癌肝轉移中的表達和功能研究.pdf

1、浙江大學博士學位論文骨橋蛋白在大腸癌肝轉移中的表達和功能研究姓名：丁凌申請學位級別：博士專業(yè)：腫瘤學指導教師：鄭樹2003.1.1浙江大掌博E研究生m業(yè)論文OPN是一種富含絲氮酸殘基的磷酸化糖蛋白，其中含有特異的ArgGlyAsp序列(RGD)，這個序列是蛋白質分子中與細胞粘附有關的重要功能域J。OPN不僅與骨組織的礦化密切相關，而且在許多非礦化組織中，如血管、內耳、腎、膽囊、胰腺、甚至在巨噬細胞和激活T淋巴細胞等中都發(fā)現了該蛋白的表達

2、，還發(fā)現它與Ca2、NO等細胞信使、巨噬細胞趨化反應、平滑肌細胞增生及感染等多種生理、病理現象密切相關mj。OPN與骨組織的礦化、泌尿系結石的形成和動脈粥樣硬化等生理、病理現象的相關性已得到犬馘文獻證實lI。”。1”，而OPN與惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展的關系特別是與腫瘤轉移的相關性正日益引起人們的關注II。但對OPN在大腸癌肝轉移中的相關機制研究，國內外尚沒有相關報道。結合基因芯片的結果，為進一步驗證和探索OPN與人腸癌及其肝轉移的關系，開展了

3、本課題研究，以期發(fā)現和探討OPN與大腸癌肝轉移發(fā)生發(fā)展的內在聯(lián)系，為l艋床預防和干預人腸癌肝轉移的發(fā)生發(fā)展提供有力的研究平臺，并提供理論依據。第一部分0PN基因nRNA表達差異研究采用RTPCR方法和實時熒光定量PCR(realtimePCR)方法分別檢測了人腸癌組織、配對正常粘膜、肝轉移組織、胃癌組織、乳癌組織、肝癌組織希T#I周血、不同人腸癌細胞株中OPN的mRNA表達差異。檢測結果發(fā)現：OPNmRNA在大腸癌肝轉移組織中表達雖高，

4、大腸癌原發(fā)組織次之，正常大腸粘膜表達最低：OPNmRNA的表達隨人腸癌的Dukes’分期增高而有增高趨勢，和病理分化程度關系不明顯：OPNmRNA在胃癌及肝癌組織中表達均較周圍正常組織增高，在配對乳腺癌組織中差異不明顯；OPNmRNA在人腸癌患者外周血中可見不同程度表達；OPNmRNA在人腸癌細胞株Colo205中目I性表達，而往SW480大腸癌細胞株中表達陰性。第二部分0PNcDNA序列克隆及反義、正義0PN真核表達質粒的構建為制備R

5、NA原位雜交探針以檢測OPNmRNA在不同組織中的定位，井為研究OPN轉移相關機制的細胞轉染作準備，運_I_fJRTPCR技術分別克隆了兩種OPNcDNA序列：反義序列(201bp)和ORF(974bp)，并由此構建了兩種重組真核表達質粒：pcDNA31()OPN(201bp)反義真核表達質粒和pcDNA31()OPN(ORF)正義真核表達質粒，為r一步研究做好前期工作。酶切和測序結果均顯示這兩種重組質粒構建成功。第三部分0PN在大腸癌