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1、腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)至周圍組織及轉(zhuǎn)移至遠(yuǎn)處器官必須首先穿越由ECM和基底膜組成的屏障。因而ECM的裂解,特別是血管基底膜的裂解十分必要。研究表明,內(nèi)切糖苷酶乙酰肝素酶(heparanase,乙酰肝素酶)裂解ECM中硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(heparansulfateprotoglycan,HSPG)分子的過(guò)程對(duì)腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移起著關(guān)鍵作用。許多年來(lái)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移潛能與乙酰肝素酶的表達(dá)密切相關(guān),轉(zhuǎn)移性大鼠和人乳腺癌細(xì)胞株中乙酰肝素酶mRN
2、A高表達(dá),而非轉(zhuǎn)移性細(xì)胞株低表達(dá)或不表達(dá)。原位雜交和免疫組化研究同樣發(fā)現(xiàn)侵襲性乳腺癌和結(jié)腸癌比相鄰非侵襲組織有更高乙酰肝素酶表達(dá)。進(jìn)一步支持乙酰肝素酶在腫瘤轉(zhuǎn)移中的作用來(lái)自轉(zhuǎn)染研究。當(dāng)淋巴瘤和黑色素瘤細(xì)胞被穩(wěn)定轉(zhuǎn)染乙酰肝素酶基因后其轉(zhuǎn)移能力得到加強(qiáng)。另外支持乙酰肝素酶參與腫瘤轉(zhuǎn)移的證據(jù)來(lái)自體內(nèi)給予乙酰肝素酶抑制劑,當(dāng)動(dòng)物腫瘤模型給予乙酰肝素酶抑制劑后,腫瘤轉(zhuǎn)移發(fā)生率明顯減少(>90%)。 本研究中我們利用乙酰肝素酶反義寡核苷酸轉(zhuǎn)
3、染結(jié)腸癌細(xì)胞系LOVO,觀察對(duì)其體外侵襲能力的抑制情況。 目的:探討乙酰肝素酶(HPSE)反義寡脫氧核苷酸對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞系LOVO侵襲力的抑制作用。 方法:設(shè)計(jì)合成互補(bǔ)于HPSEmRNA起始密碼區(qū)的硫代反義寡脫氧核苷酸AS-ODN以陽(yáng)離子脂質(zhì)體Lipofectin包裹后分不同濃度轉(zhuǎn)染LOVO細(xì)胞,以逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后HPSEmRNA表達(dá)的變化,以定量Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LOVO細(xì)胞體外
4、侵襲力的變化。 結(jié)果:與正常對(duì)照組、脂質(zhì)體對(duì)照組相比,AS-ODN各濃度組對(duì)HPSEmRNA的表達(dá)及細(xì)胞侵襲力均有明顯抑制作用(P<0.01),其抑制效應(yīng)在不同濃度組間差別顯著(P<0.01)。AS-ODN在終濃度為0.1μmol/L、0.2μmol/L和0.4μmol/L時(shí)對(duì)LOVO細(xì)胞的侵襲力抑制率分別為32.0%、54.1%和76.3%。 結(jié)論:HPSE反義寡脫氧核苷酸通過(guò)下調(diào)HPSEmRNA的表達(dá)可顯著抑制人結(jié)腸
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