卵巢癌早期診斷的預警及關鍵技術的研究.pdf

1、研究背景：卵巢癌是婦科腫瘤中病死率最高的惡性腫瘤，近10年流行病學統(tǒng)計顯示其發(fā)病及死亡人數(shù)均呈上升和年輕化趨勢。因早期無明顯臨床癥狀，60-70％患者發(fā)現(xiàn)時已屬晚期，盡管手術、放療、化療等技術不斷改進，5年生存率僅從37%上升至46%；Ⅰ期卵巢癌患者5年生存率大于90%，大部分患者通過手術即可治愈，因此卵巢癌早期診斷是提高患者5年生存率的關鍵，但只有23%的卵巢癌可做到早期診斷，考慮目前仍不能做到早期診斷的原因為：卵巢癌的病理種類繁多，

2、發(fā)展機制及病因學尚未明確，缺乏特異度及敏感度均高的腫瘤標記物，分子生物學發(fā)生機制研究尚未完善等。因此對于卵巢癌的早期診斷仍處于研究階段，目前尚無確切的可應用于臨床的理想標志物。
　　目的：通過本實驗，利用質譜分析方法在卵巢癌患者的血清和腫瘤組織中尋找差異多肽/蛋白，并采用免疫組化的方法，對卵巢漿液性癌組織切片進行HE4抗體染色，結合臨床資料，探索差異多肽/蛋白以及HE4表達情況與卵巢癌臨床特征的相關性，以此為基礎建立卵巢癌早期診斷

3、相對特異的預警體系。
　　方法：1、采用基質輔助激光解析飛行時間質譜分析（MALDI-TOF-MS）結合磁珠的技術對80例卵巢癌、84例卵巢子宮內膜異位囊腫和100例健康人群的血清行質譜分析得到血清多肽圖，經Flexanalysis3.0軟件對多肽圖進行歸一化處理標峰后，將其中48例卵巢癌、51例卵巢子宮內膜異位囊腫和60例健康人群血清作為訓練集，利用ClinprotoolsTM2.1軟件建立相應的分類診斷模型，將剩余32例卵巢癌

4、、33例卵巢子宮內膜異位囊腫和40例健康人群作為測試集驗證模型的敏感度和特異度。2.采用雙向凝膠電泳技術對3例II期卵巢漿液性癌與3例卵巢子宮內膜異位囊腫囊壁組織進行檢測，得到雙向電泳圖，篩選每組（包括1例卵巢漿液性癌和1例卵巢子宮內膜異位囊腫）差異蛋白質斑點；將三組電泳圖進行合并后對已篩選出的差異點進行復篩，選出共同差異蛋白質斑點；采用質譜兼容技術鑒定復篩出的蛋白質種類。3.采用免疫組化法對74例原發(fā)性漿液性卵巢癌組織切片進行HE4抗

5、體檢測，對表達情況進行評分，結合臨床資料，探討HE4表達與臨床特征及病理特征的相關性。
　　結果:1、卵巢癌與健康女性人群中篩出17個差異多肽峰（P＜0.05），上調13個,下調4個，m/z3373，3342，4791，6948可作為診斷截點，以此建立的診斷模型敏感度100%，特異度92.0%；該模型與CA-125相比，前者準確率100%，后者87.5%。卵巢子宮內膜異位囊腫與健康女性人群中篩查出19個差異多肽峰（P＜0.05），

6、上調15個,下調6個，診斷截點為m/z3342，6689，診斷模型敏感度81.3%，特異度100.0%。利用各期卵巢癌與卵巢子宮內膜異位囊腫血清建立診斷模型的敏感度64.7%，特異度為75%。
　　2.II期卵巢漿液性癌和卵巢子宮內膜異位囊腫中篩查出共有的蛋白質斑點4個，非共有的蛋白質斑點3個，其中下調蛋白3個，上調蛋白4個，經質譜鑒定后，上調蛋白為：細胞內視黃醇結合蛋白-2（CRBP-2），Nm-23，伴侶蛋白-10（Chape

7、ronin10），膠轉蛋白（Transgelin），下調蛋白為肌球蛋白調節(jié)亞基-9（Myl-9），視黃醇結合蛋白-1（RBP-1），膠轉蛋白-2（Transgelin-2）。
　　3.HE4在原發(fā)性卵巢漿液性癌中高表達，且在無TIC的輸卵管中已有表達，陽性表達率在各年齡階段、病理分級及有無淋巴結轉移之間的差異無統(tǒng)計學意義，與手術分期具有一定的相關性，且陽性率隨期別升高而增高。I、II期中HE4評分低于III期，且隨期別升高（I期-

8、III期），表達量也逐漸上升。
　　結論：1.采用MALDI-TOF-MS結合磁珠技術以血清為樣本的方法，可建立敏感度、特異度較高的卵巢癌、卵巢子宮內膜異位癥的分類診斷模型。卵巢癌模型的診斷準確性高于單獨應用CA-125的準確性，認為MALDI-TOF-MS結合磁珠技術可作為早期診斷的技術平臺。利用此模型可初步鑒別卵巢癌和子宮內膜異位癥，說明卵巢子宮內膜異位癥的惡性行為與卵巢癌在某些具有一定的相關性。2.Myl-9、Nm-23與腫