人臍帶間充質干細胞復合脫細胞處理的人臍帶沃頓膠取向支架體外構建組織工程軟骨.pdf

1、目的：
　　探討hUCMSCs的分離及培養(yǎng)方法并觀察其表面抗原，明確其作為組織工程種子細胞的可行性。同時，利用脫細胞處理的人臍帶沃頓膠及脫細胞處理的沃頓膠與其他材料混合制備出不同的軟骨組織工程支架并對其開展檢測，觀察其作為軟骨組織工程支架的可行性，再次將hUCMSCs與各種不同支架復合誘導分化體外構建組織工程軟骨。
　　方法：
　　經由產婦及其家屬知情同意后，取足月、剖腹產健康產婦的臍帶，分離得到人臍帶沃頓膠（Whar

2、ton jelly），采用組織塊貼壁法分離培養(yǎng)人臍帶間充質干細胞；將人臍帶沃頓膠脫細胞處理后，利用其與其他材料混合制備出不同的軟骨組織工程支架，并對各組支架開展檢測；分組對干細胞進行誘導分化：A組干細胞聚集成團誘導分化，B組干細胞與沃頓膠支架誘導分化，C組干細胞與復合支架誘導分化，然后對誘導后21天的結果分別進行HE染色、甲苯胺藍染色、Ⅱ型膠原免疫熒光染色、實時定量RT-PCR檢測，觀察最優(yōu)分化組。
　　結果：
　　1、分離

3、得到的hUCMSCs數量充足，形態(tài)均一，經檢測單純脫細胞處理的沃頓膠支架及復合支架在以下檢測中均符合組織工程支架的要求。
　　2.經過21天誘導培養(yǎng)，三組均能分化出具有一定彈性和硬度的組織塊，其中，A組組織塊較小，且硬度及彈性在三組中最差，C組組織塊體積最大，B組次之。
　　蘇木精-伊紅染色見三組中均有細胞基質分泌，但C組表達最好，A、B組稍差。
　　甲苯胺藍染色見C組中大量細胞質被染成藍色，提示強陽性，B組次之，提示

4、陽性表達，A組最差。
　?、蛐湍z原免疫熒光染色見三組中細胞核呈淡藍色熒光，細胞質呈紅色熒光，C組中有較多紅色熒光提示強陽性，B組次之，提示陽性表達，A組最差。
　　定量RT-PCR檢測示Aggrecan和Ⅱ型膠原在A、B、C組中均有表達，其中，C組表達結果最高，且較A、B均存在統(tǒng)計學差異（P＜0.05），B組表達結果次之但明顯好于A組，與A組亦存在統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。
　　結論：
　　經過脫細胞處理的人臍