外源性GM-CSF對膿毒癥DCs的生物效應.pdf

1、[研究目的]
　　 膿毒癥(sepsis)是臨床危重病癥中極為常見的一種并發(fā)癥,病情兇險、病死率高。近年來,隨著抗感染治療和器官功能支持技術的長足進步,使得膿毒癥的預后有一定的改善,但病死率仍高達30％～70％。膿毒癥的發(fā)病機制相當復雜,近年來研究證實,免疫功能紊亂在膿毒癥發(fā)生、發(fā)展過程中確實具有重要作用。膿毒癥時免疫功能紊亂并不是以往所單一認為的“過度炎癥反應”,更多的是由于“過度免疫抑制”所引起的。機體在早期經(jīng)歷了短暫的SI

2、RS反應后是長期的代償性抗炎反應綜合征(CARS)和混合性抗炎反應綜合征(MARS),導致炎癥反應失控和內環(huán)境失衡,同時伴隨有機體一系列免疫功能的改變——免疫效應細胞凋亡增加、膜分子表達變化、細胞因子分泌改變等。樹突狀細胞(DCs)是聯(lián)系固有免疫及適應性免疫的橋梁,位于免疫調節(jié)網(wǎng)絡的上游,是調節(jié)T淋巴細胞分化的關鍵。許多研究均證實,膿毒癥可導致DCs凋亡增加,數(shù)量減少,且與死亡率密切相關。粒巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)是DCs天

3、然的活化刺激物,在膿毒癥時血清濃度下降,且亦與預后相關。本研究擬觀察外源性GM-CSF對膿毒癥小鼠模型脾臟DCs數(shù)量、凋亡率及分泌IL-12能力的影響,同時觀察生存率的變化,以探討GM-CSF對膿毒癥DCs的生物效應及臨床應用價值。
　　 [研究方法]
　　 1、實驗動物分組
　　 GM-CSF對膿毒癥小鼠脾臟DCs數(shù)量、凋亡率及血清IL-12的影響:選擇體重25g(6～8周)雄性昆明鼠120只,隨機分配入組。正

4、常對照組:40只,不予特殊處理,正常喂養(yǎng)；CLP組:32只,盲腸結扎穿孔；常規(guī)治療組:24只,CLP術后12、24、36、48、60、72、84h腹腔注射頭孢曲松(上海羅氏)5mg/kg；GM-CSF治療組:24只,CLP術后除常規(guī)治療外另于12、36、60、84h皮下注射GM-CSF(美國PeproTech公司)20ug/kg。
　　 GM-CSF對膿毒癥小鼠生存預后的影響:雄性昆明鼠40只隨機分配入正常對照組、CLP組、常規(guī)

5、治療組、GM-CSF治療組,每組10只。累計96h時死亡及存活個數(shù)。
　　 2、實驗方法
　　 各組于CLP術后0、12、24、48、72h分批處死小鼠(n=8),流式細胞儀測定各組脾臟DCs數(shù)量及凋亡率,ELISA法檢測各組血清IL-12濃度。
　　 3、統(tǒng)計方法
　　 測量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差((x)±s)表示,應用One-Way ANOVA方法進行統(tǒng)計分析；并應用Logist回歸方法分析不同處理因素對

6、于生存率的影響。以P>0.05為差異不顯著、無統(tǒng)計學意義,P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。
　　 [結果]
　　 1、脾臟DCs數(shù)量及凋亡率:CLP組在整個觀察窗的所有時間點脾臟DCs凋亡增加,數(shù)量明顯減少(P<0.05)；常規(guī)治療(頭孢曲松)可以加劇DCs的丟失(P<0.05)；GM-CSF可以增加膿毒癥時脾臟DCs的數(shù)量(P<0.05),但由于本實驗未設置GM-CSF單獨治療組,其效應部分與頭孢菌素疊加,48、72

7、h時和CLP組無差異(P>0.05),但通過Logist回歸分析,可以看出GM-CSF是獨立保護性因子(OR=0.079)。在增加DCs數(shù)量的同時,GM-CSF也增加其凋亡(P<0.05),推測是繼于DCs活化的后效應,即所謂激活誘導細胞死亡(AICD)。
　　 2、血清IL-12濃度:CLP組IL-12血清濃度表現(xiàn)為于12h高峰的單向曲線趨勢(P<0.05)；常規(guī)治療(頭孢曲松)對這一趨勢無干預效應(P>0.05)；GM-CS

8、F干預后IL-12濃度顯著下降(P<0.05),推測GM-CSF能夠促進DCs分化成熟,增加其抗原呈遞能力,同時減少IL-12的釋放。
　　 3、不同處理因素對于生存率的影響:Logist回歸分析入選CLP及GM-CSF兩因素,而剔除了常規(guī)治療措施——頭孢曲松,同時分析得GM-CSF是保護性因子(OR=0.079)。
　　 [結論]
　　 膿毒癥時脾臟DCs凋亡增加、數(shù)量減少,IL-12釋放增多,且GM-CSF血