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文檔簡介
1、目的:白細胞介素-5(IL-5)被證實能對抗動脈粥樣硬化(As)發(fā)生發(fā)展,其具體作用機制尚未被完全認識。本研究旨在探討 IL-5能否通過JAK2/STAT3途徑上調(diào)THP-1巨噬細胞ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1(ABCA1)表達。
方法:將 THP-1細胞誘導轉(zhuǎn)變成泡沫細胞,經(jīng)不同濃度的IL-5處理相同時間或同一濃度IL-5(0.15 ng/mL)處理不同時間(0,6,12,24,48 h),用油紅O染色觀察細胞內(nèi)脂滴多少,高效液相
2、色譜法測定細胞內(nèi)膽固醇含量,液體閃爍計數(shù)法檢測細胞內(nèi)膽固醇流出率;Western blot測定細胞內(nèi)ABCA1蛋白含量,實時定量PCR檢測ABCA1 mRNA水平。IL-5或抗IL-5抗體處理細胞24小時,Western blot檢測細胞內(nèi)磷酸化的JAK2、STAT3及總蛋白水平。JAK2和STAT3抑制劑或轉(zhuǎn)染JAK2和STAT3 siRNA對IL-5作用下的細胞處理24小時,檢測細胞內(nèi)ABCA1、JAK2和磷酸化STAT3蛋白水平。
3、
結(jié)果:IL-5能夠上調(diào)THP-1巨噬細胞ABCA1蛋白及mRNA表達水平,且呈現(xiàn)出一定時間和劑量依賴性。進一步實驗證實 IL-5通過激活JAK2和STAT3,增加細胞內(nèi)ABCA1基因轉(zhuǎn)錄以及ABCA1蛋白表達,促進細胞內(nèi)膽固醇流出,減少膽固醇蓄積;JAK2和STAT3抑制劑預處理或相應特異性siRNA轉(zhuǎn)染荷脂后的THP-1巨噬細胞, 能顯著削弱IL-5促進ABCA1蛋白表達的作用。
結(jié)論:IL-5可通過激
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