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文檔簡介
1、集約化養(yǎng)殖中,仔豬腹瀉屬常見病癥,腸產毒性大腸桿菌(enterotoxigenic E.coli,ETEC)是主要病原菌之一,造成的經濟損失嚴重。卵黃抗體(Eggyolk immunoglobulin,IgY)作為一種抗生素替代品用來控制仔豬腹瀉已有一定的研究基礎,但抗體滴度和產率低限制了IgY的應用,免疫佐劑是主要影響因素之一。而常用的弗氏佐劑有一定的毒副作用,免疫原性弱,安全性較差,故尋找高效安全的佐劑來獲得大量的高效價IgY用于防
2、治ETEC引起的仔豬腹瀉任務迫切。CpG-ODN(Oligodeoxynucleotide DNA,ODN)是一種高效安全的疫苗佐劑,可以有效提高機體的免疫應答水平。黃芪多糖、殼聚糖作為中藥類免疫佐劑,存在資源廣泛、成本低廉的優(yōu)點,應用前景良好。
本實驗根據目前研究中表明的CpG-ODN的免疫活性與其序列結構特點的關系,以CpG-ODN2135為模板設計了4條不同序列的CpG-ODN。通過體外實驗和體內實驗分別探討了不同序列的
3、CpG-ODN佐劑、殼聚糖、弗氏佐劑及黃芪多糖佐劑對蛋雞細胞和體液免疫應答方面的影響。應用 CCK-8法體外檢測不同佐劑對雞脾臟淋巴細胞的刺激作用,結果表明CpG-ODN S2序列的免疫刺激活性最好,刺激指數可達3.64。
通過體內實驗考察不同佐劑配合ETEC滅活疫苗免疫蛋雞后對蛋雞產蛋性能、細胞免疫及體液免疫的影響。選取來航蛋雞(120日齡)120只,隨機分為10組,三點注射免疫法分別進行3次免疫。第1~2組分別應用PBS和
4、ETEC K88滅活全菌疫苗;第3~7組應用ETEC K88分別配合不同序列的CpG-ODN S1~S5(30μg/羽);第8~10組應用ETEC K88分別配合弗氏佐劑、殼聚糖佐劑(200 mg/mL)和黃芪多糖佐劑(25 mg/mL)。
產蛋率結果顯示,整個實驗期間弗氏佐劑組平均產蛋率(71.81%)顯著低于其他組,嚴重影響蛋雞的產蛋性能。應用ELISA法檢測的血清中IL-2及IFN-γ含量、血清抗體效價、IgY效價結果表
5、明,黃芪多糖組初免后可快速激活細胞因子IL-2(229.64 ng/L)、IFN-γ(28.58 ng/L);CpG-ODN S2組在整個實驗期間IL-2、IFN-γ的分泌量均較高,強度和持久度最好,對蛋雞細胞免疫水平的影響明顯優(yōu)于弗氏佐劑(P<0.05)。CpG-ODN S2組血清抗體、IgY效價最高分別可達95.00萬、80.00萬,且強度和持久度最好,對蛋雞體液免疫水平的影響明顯優(yōu)于弗氏佐劑(P<0.05);S1組和S4組IgY效
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