土鱉蟲含藥血清對激素誘導骨髓間充質干細胞成脂和成骨分化差異蛋白組學的影響.pdf

1、目的:
　　 探討土鱉蟲干預骨髓間充質干細胞(BMSCs)成脂和成骨分化的分子生物學機制,檢驗抑制成脂分化和促進成骨分化的靶位蛋白或相關蛋白,為中藥土鱉蟲治療激素所致的股骨頭缺血性壞死提供理論依據。
　　 方法:
　　 1.選用優(yōu)質中藥土鱉蟲,采用十天法制備土鱉蟲含藥血清。
　　 2.取4周齡清潔級SD大鼠脛骨和股骨骨髓進行BMSCs貼壁培養(yǎng)和傳代,檢測傳三代BMSCs表面抗原CD45、CD90的表達陽性

2、率以鑒定,用油紅“O”染色對分化的脂肪細胞進行鑒定。
　　 3.傳三代BMSCs分為空白對照組、激素組和土鱉蟲組。激素組:應用大劑量激素誘導使其向脂肪細胞分化,土鱉蟲組:激素誘導的同時給予土鱉蟲含藥血清干預。
　　 4.各組干預6天后對成骨和成脂標志物堿性磷酸酶(ALP)、甘油三酯(TG)檢測。
　　 5.利用光鏡和電鏡觀察三組BMSCs細胞的細微和超微結構特點。
　　 6.運用同位素標記相對和絕對定量技

3、術(iTHA,Q)標記三組樣本的蛋白,二維液相色譜質譜儀(2DLC-MS/MS)鑒定蛋白并進行相對定量分析。
　　 結果:
　　 1.根據表面抗原CD45和CD90的陽性率,鑒定培養(yǎng)的細胞是BMSCs;根據油紅“O”染色,鑒定激素誘導BMSCs成脂肪細胞。
　　 2.甘油三酯檢測結果:激素組較空白對照組明顯升高(P＜0.05),土鱉蟲組較激素組明顯下降(P＜0.01)。
　　 3.堿性磷酸酶檢測結果:激素

4、組較空白對照組明顯下降(P＜0.05),土鱉蟲組較激素組明顯升高,(P＜0.01)。
　　 4.透射電鏡觀察超微結構結果:空白對照組大鼠BMSCs細胞表面有較豐富的微絨毛樣突起。細胞質可見較多細胞器,可見少量脂肪滴。激素組的BMSCs細胞表面無微絨毛樣突起。細胞內可見大量脂肪滴,少量細胞器。部分細胞核溶解,破裂。土鱉蟲組的BMSCs細胞表面有少量的微絨毛樣突起。細胞器數量一般,未見脂肪滴。
　　 5.通過質譜鑒定共成功檢

5、測出了三組樣本近520種蛋白質,其中217種蛋白質有定量信息。以激素組為對照,在空白對照組中共有15種蛋白質出現(xiàn)顯著的表達上調,12種出現(xiàn)下調蛋白:在土鱉蟲組中共有16種蛋白質出現(xiàn)顯著的表達上調,14種出現(xiàn)顯著下調。
　　 結論:
　　 1.土鱉蟲含藥血清可以抑制BMSCs成脂分化,促使BMSCs成骨分化。
　　 2.通過質譜鑒定三組共成功檢測出了520種蛋白質,其中217種蛋白質有定量信息。
　　 3.