雌激素對大鼠脂肪干細胞誘導(dǎo)成骨成脂分化影響的研究.pdf

1、雌激素參與骨調(diào)節(jié)代謝及脂肪組織的分布，分解及合成、沉積。中老年女性增齡性變化通常伴隨表現(xiàn)有骨質(zhì)疏松以及雌激素水平的下降，隨之機體脂肪組織增加造成中心性肥胖。對于婦女的機體變化既要考慮性腺功能衰退，也要考慮年齡因素造成的身體機能的下降。骨脂代謝中的成骨細胞和脂肪細胞可能是由同一前體細胞即干細胞分化而來，二者的分化平衡可能受相同因素影響。脂肪干細胞(adipose-derivedstemcells,ADSCs)由于其自身具備的諸多優(yōu)點成為了

2、近年干細胞研究的熱點。目前，雌激素和增齡性改變對大鼠ADSCs誘導(dǎo)分化中的作用尚不清楚。本研究以3月和18月齡雌性SD大鼠來源的ADSCs為對象，擬觀察雌激素與增齡性因素對ADSCs體外增殖及誘導(dǎo)成骨，成脂肪分化能力的影響，探討雌激素與增齡改變在ADSCs成骨成脂分化調(diào)控平衡中可能的作用。
　　研究內(nèi)容包括：
　　1．脂肪干細胞的分離，純化培養(yǎng)鑒定：
　　采用密度梯度離心和自然貼壁法分別從3月和18月齡雌性SD大鼠腹股

3、溝脂肪處分離純化培養(yǎng)ADSCs，倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)，流式細胞儀對其表面標(biāo)志物進行檢測，具有基質(zhì)干細胞表面抗原CD29和CD105陽性，CD34陰性而排除其為造血干細胞可能。同時經(jīng)由成骨，成脂的誘導(dǎo)陽性結(jié)果也逆向證實培養(yǎng)分離的細胞為ADSCs。
　　2.雌激素對脂肪干細胞生長增殖的影響：
　　通過MTT法檢測不同月齡ADSCs生長增殖以及雌激素對其影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，3月齡較18月齡ADSCs生長增殖能力強，雌激素處理后能促進

4、細胞的生長增殖。
　　3.雌激素對于不同月齡大鼠ADSCs體外誘導(dǎo)成骨分化能力的影響：
　　分別取3月齡和18月齡第三代ADSCs預(yù)設(shè)為（1）單純成骨誘導(dǎo)組，（2）成骨誘導(dǎo)雌激素處理組，含雌激素終濃度為10-7M（3）普通單純培養(yǎng)非誘導(dǎo)組。通過茜素紅染色及OCN檢測不同月齡和雌激素處理下ADSCs體外成骨分化的能力。結(jié)果顯示：成骨誘導(dǎo)條件下第21天同月齡雌激素處理組茜素紅染色陽性面積大于單純誘導(dǎo)組，相同誘導(dǎo)條件下茜素紅染色陽

5、性面積3月齡組大于18月齡組；RT-PCR半定量檢測顯示成骨誘導(dǎo)下同月齡雌激素組較單純誘導(dǎo)組OCN表達強烈，相同成骨誘導(dǎo)條件下3月齡組較18月齡組OCN表達強烈；非誘導(dǎo)組染色及OCN檢測陰性。結(jié)論：雌激素能增強大鼠ADSCs體外誘導(dǎo)成骨分化能力，其誘導(dǎo)成骨分化能力隨增齡性變化下降。
　　4.雌激素對于不同月齡ADSCs體外誘導(dǎo)成脂分化能力的影響：
　　方法：分別取3月齡和18月齡第三代ADSCs預(yù)設(shè)為:（1）單純成脂誘導(dǎo)組;

6、（2）雌激素處理成脂誘導(dǎo)組，含雌激素終濃度為10-7M;（3）單純培養(yǎng)非誘導(dǎo)組。油紅O染色及LPL檢測雌激素處理和不同月齡的ADSCs體外成脂分化能力的區(qū)別。結(jié)果顯示：成脂誘導(dǎo)第5天同月齡雌激素處理組油紅O染色陽性面積大于單純誘導(dǎo)組,RT-PCR檢測雌激素處理組較單純誘導(dǎo)組LPL表達強烈；相同誘導(dǎo)條件下3月齡組油紅O染色陽性面積大于18月齡組，RT-PCR檢測3月齡組LPL表達較18月齡組強烈；而單純培養(yǎng)非誘導(dǎo)組油紅染色及LPL檢測均為