中藥莪術化學成分分析及藥代動力學研究.pdf

1、莪術始載于《藥性論》，為姜科植物蓬莪術Curcuma phaeocaulis Val、廣西莪術Cucuma kwangsiensis S.G. Lee et C.F. Liang 或溫郁金Curcuma wenyujin Y.H. Chen etC. Ling的干燥根莖，后者習稱―溫莪術‖。其性味辛、苦、溫，歸肝、脾經(jīng)，具行氣破血、消積止痛功效。臨床用于治療癓瘕痞塊、瘀血經(jīng)閉、食積脹痛、早期宮頸癌等癥。研究表明，莪術中主要有效成分莪術油

2、的含量較高，莪術油具有抗腫瘤、抗菌、抗病毒、抗氧化和保肝等廣泛的藥理活性，其中抗腫瘤活性物質主要為莪術醇(curcumol)、欖香烯(elemene)、莪術二酮(curdione)等。
　　 我國莪術藥材資源豐富，約有20個品種，主要分布于四川、福建、浙江、廣西等地，原料易得。本課題旨在建立鑒別與區(qū)分莪術化學成分方法；同時進行莪術提取物的質量標準研究；對莪術提取物中活性成分莪術二酮進行初步的藥代動力學探索研究。具體研究內容如下：

3、
　　 1.頂空氣相色譜-質譜聯(lián)用結合化學計量學方法用于莪術化學成分分析與質量控制
　　 本課題首次采用頂空氣相色譜-質譜（HS-GC/MS）聯(lián)用技術分析中藥莪術化學成分，采用HP-5 (30m×0.32 mm×0.25 μm）石英毛細管色譜柱，進樣口溫度為250°C，柱初始溫度為50°C，保持3 min，以20°C/min 升至150°C，最后以2 °C/min 升至200°C，保持10min。載氣為高純度氦氣，流速1

4、.0ml/min，分流比10:1。頂空瓶平衡溫度為90°C，平衡時間為30min，進樣量為1.5 ml，在24 min內分離得到68種化學物質。再將HS-GC/MS與化學計量學的方法相結合，通過分析莪術中的化學成分，對中藥莪術的來源進行分析，目的用于鑒別與區(qū)分不同產(chǎn)地來源的莪術藥材，并找到對不同質量的莪術藥材起主要分類作用的特征性成分。
　　 2.液相色譜-質譜聯(lián)用在莪術化學成分分析
　　 研究中的應用由于莪術藥材中大多

5、數(shù)為揮發(fā)性成分，雖然采用GC-MS 技術能很好的對其進行分析，但是莪術藥材中有許多分子量相近或相同的化學成分，單靠GC-MS 無法對其進行鑒別。因此我們首次采用了超高效液相色譜-飛行時間質譜（UPLC-QTOF/MS）聯(lián)用技術對莪術化學成分進行了初步鑒別，檢測莪術中分子量相近的化學成分，其色譜質譜條件為：采用Agilent XDB-C18 (5 μm， 250mm×4.6 mmI.D.)色譜柱，流動相采用乙腈-水（含0.1％甲酸），柱溫

6、為30°C，流速為0.4 ml/min。
　　 離子源為ESi源，正離子模式，質譜掃描范圍100-1100m/z，毛細管電壓4500V，干燥氣流速為11l/min，干燥氣溫度為350°C；霧化器壓力為50psig，裂解器電壓為150V。在35 min內初步鑒別出12個化學成分，從中我們發(fā)現(xiàn)有相同質荷比為237.1854的三種物質，它們是neocurdione、curdione、curcumol，相同質荷比為219.1744的γ-

7、tumerone、germacrone 這兩種物質，單從分子量來看，無法將其明確區(qū)分。因此，結合液相色譜-離子阱質譜（HPLC-QIT/MS）聯(lián)用技術對其中3種成分curdione、curcumol、germacrone的對照品進行了多級裂解分析。色譜質譜方法為：
　　 采用Agilent ZORBAX SB-C18 (3.5 μm，100mm×2.1mm I.D.)色譜柱，流動相采用乙腈-水（含0.5％甲酸），柱溫為30°C，

8、流速為0.3 ml/min，分析時間為25 min，通過多級打擊，推測其可能的裂解途徑。最后，根據(jù)推測的途徑，確認了以上五種物質。
　　 3.氣相色譜-質譜聯(lián)用測定
　　 莪術中5種主要指標性成分的含量а-哌烯、欖香烯、莪術醇、吉馬酮、莪術二酮是產(chǎn)生藥理活性的主要化合物。
　　 因此，在莪術油的提取過程中，對其進行質量控制具有重要意義。本研究中，采用GC-MS 聯(lián)用技術，建立了5種主要指標性成分的含量測定方法，標

9、準曲線為а-哌烯：
　　 y=0.3387x+0.0036 (r=0.9987)，線性范圍0.0113-0.5631μg/ml；欖香烯：y=0.0636x-0.0104 (r=0.9997)，線性范圍0.2501-12.5061μg/ml；莪術醇：y=0.0285x-0.0148(r=0.9993)，線性范圍0.5155-25.7339 μg/ml；吉馬酮：y=0.1138x-0.0932 (r=0.9996)，線性范圍3.33

10、26-166.6294 μg/ml；莪術二酮：y=0.1161x-0.073 (r=0.9996)，線性范圍1.9348-96.7398 μg/ml。同時，我們還比較了不同產(chǎn)地、不同品種的16 批次莪術藥材，發(fā)現(xiàn)含量差異較大。本法可以快速、簡單、有效的對莪術進行質量控制。
　　 4.莪術中莪術二酮的藥代動力學研究
　　 莪術二酮具有抗炎鎮(zhèn)痛的藥理作用，對其進行初步藥代動力學評價有利于進行深入的研究。本文首次建立了血漿樣品

11、中莪術二酮的分析方法，實驗中采用甲醇蛋白沉淀法對血漿樣品進行預處理，建立了以原人參二醇為內標的UPLC-QTOF/MS檢測大鼠血漿中莪術二酮的體內分析方法。色譜分析采用Agilent Extend-C18 column(1.8μm，50mm×2.1mm I.D.)色譜柱；流動相為：水（A，含0.1％甲酸）-乙腈 (B，含0.1％甲酸)，梯度洗脫程序為0-5 min，40-55％ B；5-15min，55-85％ B，柱溫為30°C，流速

12、為0.3 ml/min。離子源為ESi源，正離子模式，質譜掃描范圍100-1100m/z；
　　 毛細管電壓4500V，干燥氣流速11l/min，干燥氣溫度為350°C；霧化器壓力為50psig，裂解器電壓為150V。本文建立的生物樣品預處理方法和UPLC-QTOF/MS分析測定生物樣品中莪術二酮的含量，該成分線性范圍在0.12-12.26 μg/ml內，精密度和穩(wěn)定性實驗結果均符合要求。血漿中內源性物質均不干擾樣品峰的測定，該