藥對知母-黃柏的降糖作用及基于液質聯用技術的化學物質研究.pdf

1、目的：
　　1.研究藥對知母-黃柏的降糖作用;
　　2.研究藥對知母-黃柏中主要有效成分芒果苷、新芒果苷、知母皂苷AⅢ、知母皂苷BⅡ以及生物堿類成分巴馬汀、藥根堿、黃柏堿、木蘭花堿和小檗堿的質譜裂解規(guī)律;
　　3.對藥對知母-黃柏合煎液中的化學成分進行分析鑒別;
　　4.測定藥對知母-黃柏中芒果苷、新芒果苷、巴馬汀、小檗堿等九種主要有效成分的含量，并與單味藥比較考察其含量變化;研究知母與黃柏按不同比例配伍對九種有

2、效成分含量的影響。
　　方法：
　　1.藥對知母-黃柏的降糖作用研究:采用高脂高糖飼料喂養(yǎng)聯合腹腔注射小劑量鏈脲佐菌素(STZ)法建立Ⅱ型糖尿病大鼠模型并進行分組，糖尿病大鼠灌胃藥對知母-黃柏合煎液四周，測定空腹血糖、膽固醇等指標并進行糖耐量實驗。
　　2.運用UPLC-LTQ-Orbitrap對芒果苷、新芒果苷、小檗堿等有效成分的對照品溶液進行多級質譜解析，總結裂解規(guī)律。
　　3.藥對知母-黃柏化學成分的鑒別:

3、建立UPLC-LTQ-Orbitrap法對藥對知母-黃柏合煎液進行全成分分析，結合主要成分的裂解規(guī)律、對照品比對、查閱相關文獻等多種方法對各成分進行分析鑒別。
　　4.有效成分的含量測定:建立LC-MS/MS法測定知母和黃柏不同比例配伍時芒果苷、新芒果苷、知母皂苷AⅢ、知母皂苷BⅡ、巴馬汀、藥根堿、黃柏堿、木蘭花堿和小檗堿的含量。
　　結果：
　　1.糖尿病大鼠給藥四周后，模型組血糖繼續(xù)升高，藥對知母-黃柏和鹽酸二甲雙

4、胍均對糖尿病大鼠血糖升高產生了抑制作用，藥對知母-黃柏能夠調控糖尿病大鼠血漿中膽固醇和甘油三酯水平，通過多靶點作用發(fā)揮中藥治療糖尿病的作用。
　　2.運用UPLC-LTQ-Orbitrap對藥對知母-黃柏中主要成分的裂解規(guī)律進行了總結，在正離子模式下，脫水(H2O)或者甲基(CH3)、亞甲基(CH2)是一個重要的裂解方式。知母皂苷類成分，主要是通過脫去葡萄糖(C6H12O6)或者脫水葡萄糖(C5H10O5)進行裂解;相同分子質量的

5、成分因為空間結構不同產生不同的分子碎片。
　　3.運用UPLC-LTQ-Orbitrap于碰撞誘導解離(CID)模式分析藥對知母-黃柏水煎液，依據主要成分的裂解規(guī)律并參考相關文獻，共鑒別出61個化學成分，包括知母皂苷類化學成分9個，生物堿類化學成分25個，其他各類成分27個，知母皂苷類成分易與流動相中甲酸結合，產生M+46加合峰。
　　4.建立LC-MS/MS法測定了藥對知母-黃柏中九種主要成分的含量:當知母和黃柏配伍比例為

6、1:1時，芒果苷、新芒果苷、知母皂苷BⅡ和知母皂苷AⅢ的含量分別為4.96、9.33、3.62、43.6 mg·g-1，與單味藥知母相比BⅡ的含量基本不變，芒果苷、知母皂苷AⅢ的含量減少，新芒果苷的含量增加;巴馬汀、藥根堿、黃柏堿、木蘭花堿、小檗堿的含量分別為0.75、0.48、2.62、1.29、33.18 mg·g-1，與黃柏單味藥相比，巴馬汀的含量降低，其余四種成分含量基本保持不變;不同配伍比例對藥對知母-黃柏中有效成分含量有影響

7、，知母單煎時芒果苷、知母皂苷AⅢ含量最高;新芒果苷在知柏配伍比例1∶1時含量最高，巴馬汀與藥根堿此時含量最低;知母皂苷BⅡ和藥根堿的含量各配伍比例沒有明顯差異;木蘭花堿含量的在知母與黃柏1∶2配伍時含量最高。
　　結論：
　　本文通過建立Ⅱ型糖尿病大鼠模型驗證了藥對知母-黃柏的降糖作用;運用UPLC-LTQ-Orbitrap法，研究了藥對知母-黃柏中主要成分的裂解規(guī)律，并以此為依據，結合相關文獻資料鑒別了藥對知母-黃柏水煎液