MiR-223靶向IGF2和ZEB1調控家禽成肌細胞的增殖和分化.pdf

1、MicroRNA是一種內源性小分子非編碼RNA，廣泛存在于真核生物中并參與調控各類細胞進程。大量研究表明，miRNA參與了雞胚生長發(fā)育、神經(jīng)細胞和肌肉細胞的增殖和分化、細胞遷移、性成熟和免疫應答等一系列生命活動，對肉雞的生長、發(fā)育和代謝具有重要的調控作用。本研究在實驗室前期成果的基礎上，篩選出miR-223作為研究肉雞生長性能的候選基因，并以miR-223為切入點，一方面探索miR-223在骨骼肌生長發(fā)育中的生物學功能，另一方面研究mi

2、R-223及其靶基因作用于骨骼肌細胞增殖和分化的分子機理。論文主要結果如下：
　　1．通過qRT-PCR技術發(fā)現(xiàn)miR-223在雞胚肌肉發(fā)育過程中呈先上升后下降的趨勢，其中，在肌肉快速發(fā)育的12E-17E高表達，說明miR-223參與雞胚的肌肉發(fā)育。
　　2．通過成肌細胞的體外誘導分化實驗發(fā)現(xiàn) miR-223在成肌細胞分化過程中持續(xù)極顯著上升，說明miR-223可能對成肌細胞的分化具有重要調控功能。
　　3．通過流式細

3、胞術、CCK-8和qRT-PCR檢測過表達和干擾miR-223的成肌細胞，結果表明：miR-223在成肌細胞中具有抑制細胞增殖和促進細胞分化的功能。
　　4．利用生物信息學分析和參考文獻報道，預測與細胞增殖分化相關的IGF2基因和 ZEB1基因為 miR-223的靶基因，并通過雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)、qRT-PCR和western blot等試驗，確定miR-223能夠靶向抑制IGF2和ZEB1基因的表達。
　　5．過表達和