miR-18a調(diào)控胰腺祖細(xì)胞的增殖及其作用機(jī)制的研究.pdf

1、糖尿病是由于胰島β細(xì)胞破壞或胰島素抵抗導(dǎo)致的胰島素相對(duì)或絕對(duì)缺乏而引起，十分具有前景的治療糖尿病的策略是通過胰腺干/祖細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞、骨髓干細(xì)胞、臍血干細(xì)胞等定向誘導(dǎo)分化為胰島β細(xì)胞，或者通過藥物的作用胰島β細(xì)胞的再生。目前，干細(xì)胞治療糖尿病方面已經(jīng)取得一定進(jìn)展，但仍需進(jìn)一步研究干/祖細(xì)胞增殖、分化和發(fā)育機(jī)制，才能獲得更高效治療效果。另外，研究表明胰腺癌發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，其早期癥狀不明顯，至今尚無有效的早期診斷方法，而且胰腺癌侵襲

2、性強(qiáng)，惡性程度高，手術(shù)切除率低，預(yù)后極差，死亡率接近100％，因此研究胰腺癌細(xì)胞的增殖、侵襲等機(jī)制極為重要，為胰腺癌的早期診斷及治療提供理論基礎(chǔ)。
　　microRNA（miRNA）是一類重要的小分子RNA，其在轉(zhuǎn)錄后階段調(diào)控靶標(biāo)基因的表達(dá)，識(shí)別miRNA的靶標(biāo)基因是認(rèn)識(shí)其調(diào)節(jié)功能的關(guān)鍵。在胰腺發(fā)育早期階段，低水平Ptf1a促進(jìn)胰腺祖細(xì)胞向內(nèi)分泌方向分化，相反，高水平Ptf1a促進(jìn)胰腺祖細(xì)胞向外分泌方向分化。研究表明，Ptf1a是

3、miR-18a的直接靶基因，miR-18a通過調(diào)控Ptf1a的表達(dá)調(diào)控胰腺祖細(xì)胞的命運(yùn)。此外，研究表明miR-18a在結(jié)腸癌細(xì)胞系中，miR-18a和miR-17-92的其他成員作用相反，尤其是和miR-19的作用相反，是作為抑制細(xì)胞增殖的miRNA發(fā)揮作用的。在miR-17-92成員中，miR-18a是唯一一個(gè)在形成成熟miRNA過程中需要hnRNPA1處理的miRNA。miR-17-92的末端折疊結(jié)構(gòu)也降低了miR-18a在形成成熟

4、miRNA的過程中的編輯效率。miR-18a可能是作為一個(gè)平衡miR-17-92家族促進(jìn)癌癥發(fā)生的作用而存在的。然而關(guān)于miR-18a調(diào)控胰腺祖細(xì)胞和胰腺癌細(xì)胞的增殖的作用還沒有相關(guān)報(bào)道。
　　本課題通過在分離的胰腺祖細(xì)胞過表達(dá)miR-18a，發(fā)現(xiàn)可以明顯抑制胰腺祖細(xì)胞的增殖，抑制PI3K/AKT信號(hào)通路和ERK信號(hào)通路，但后者作用并不明顯。通過靶基因的篩選、鑒定和功能研究，發(fā)現(xiàn)CTGF、NEDD9、IGF1和CDK19是miR-

5、18a的靶基因，但只有干涉CTGF、NEDD9和CDK19才會(huì)抑制胰腺祖細(xì)胞的增殖，同時(shí)影響PI3K/AKT和ERK信號(hào)通路。miR-18a通過調(diào)控CTGF、NEDD9和CDK19而調(diào)控胰腺祖細(xì)胞的增殖。對(duì)于胰腺癌細(xì)胞系BXPC3而不是PANC-1，過表達(dá)miR-18a明顯抑制癌細(xì)胞的增殖及ERK的信號(hào)通路，但抑制內(nèi)源性miR-18a的表達(dá)則無明顯作用。干涉miR-18a其中一個(gè)靶基因NEDD9抑制胰腺癌細(xì)胞系BXPC3的增殖，對(duì)PAN