調(diào)控S1P1受體信號通路對糖氧剝后星形膠質(zhì)細胞增殖的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：
　　觀察鞘氨醇1-磷酸1型受體（The sphingosine1-phosphate receptor，S1P1R）抑制劑W146對糖氧剝奪（Oxygen-glucose deprivation,OGD）后星形膠質(zhì)細胞增殖能力的影響。
　　方法：
　　取出生后3天內(nèi)SD（Sprague-Dawley）乳鼠大腦皮層組織進行星形膠質(zhì)細胞原代培養(yǎng)。取第三代細胞予以免疫熒光鑒定其純度后進行后續(xù)試驗步驟。采用免疫熒光雙標

2、法檢測S1P1R在星形膠質(zhì)細胞上的表達。將接種于培養(yǎng)皿中的細胞隨機分為3組：CONTROL組、OGD/R組以及OGD/R+W146組。OGD處理細胞2小時模擬缺氧環(huán)境建立星形膠質(zhì)細胞缺氧模型，恢復糖氧供應時CONTROL組細胞予以普通培養(yǎng)基、OGD/R組細胞予以培養(yǎng)基+等濃度藥物溶劑（無水乙醇）、OGD/R+W146組細胞予以培養(yǎng)基+W146（10uM）?；謴吞茄豕?h、6h、12h以及24h時間點行EDU、流式細胞術檢測處于增殖期

3、（S期）細胞比率；恢復糖氧供應后12h、24h、48h、72h時點，行噻唑藍（MTT）檢測星形膠質(zhì)細胞增殖活性；蛋白免疫印跡法檢測S1P1R蛋白表達水平。
　　結果：
　　S1P1R在星形膠質(zhì)細胞上有表達。OGD后星形膠質(zhì)細胞增殖能力升高：與CONTROL組相比，OGD組細胞增殖活性顯著增加（P<0.05），處于S期細胞比率明顯增加，S1P1R蛋白表達水平上調(diào)，有統(tǒng)計學意義（6h和12h，P<0.05）。與OGD/R組相比，

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