AEG1促進自噬抑制細胞失巢凋亡在肝癌中的作用研究.pdf

1、目的：肝癌是全球第五常見且未能得到有效治療的惡性腫瘤。因其早期易發(fā)生血管轉移，嚴重影響患者預后。腫瘤細胞脫離原癌巢、滲入血管、發(fā)生轉移的過程，稱為“失巢”；而細胞失巢后，因其脫離細胞間及基質的接觸支持而發(fā)生程序性死亡，即“失巢凋亡”。不同的腫瘤細胞對失巢凋亡的抵抗能力不同，抵抗能力越強，侵襲轉移越強。近年來，AEG1被證實為對肝癌的侵襲轉移有重要作用的原癌基因；而自噬是通過吞噬消化自身部分蛋白或器官來度過不利環(huán)境的一種生命活動，那么AE

2、G1、自噬、失巢凋亡抵抗在肝癌細胞轉移中起什么作用?本課題研究AEG1能否促進自噬，進而增強肝癌細胞失巢凋亡抵抗能力，最終以促進肝癌轉移，并探索此過程中主要信號途徑。闡明AEG1、自噬、失巢凋亡、肝癌轉移間的關系和主要機制，為尋找干預肝癌轉移靶點打下基礎。
　　方法：建立肝癌細胞體外失巢模型，利用質粒和小干擾RNA，分別在肝癌細胞系SMMC-7721和HCC-LM3中上調和下調AGE1的表達，在模擬失巢條件下，Western bl

3、ot和流式細胞學檢測上調和下調AEG1表達后細胞凋亡率的改變；同時Western blot、GFP-RFP雙熒光系統(tǒng)檢測自噬水平。在上調AEG1的同時利用siRNA抑制自噬，在模擬失巢的情況下，Western blot檢測自噬水平降低程度和凋亡情況，同時流式細胞學檢測凋亡率。最后探討模擬失巢情況下，通過Western blot檢測AEG1調節(jié)自噬促進失巢凋亡抵抗的主要信號通路。
　　結果：肝癌細胞株SMMC-7721過表達AEG1

4、后模擬失巢培養(yǎng)24小時，凋亡率明顯低于對照組（P<0.05）；HCC-LM3細胞中干擾AEG1的表達，模擬失巢培養(yǎng)24小時后，凋亡率明顯高于對照組（P<0.05）。SMMC-7721細胞過表達AEG1后模擬失巢培養(yǎng)，自噬GFP-RFP雙熒光系統(tǒng)檢測，以及WB顯示自噬蛋白LC3 Ⅰ型向Ⅱ型轉變增加，Ⅱ/Ⅰ型比值增大，說明自噬流增強；HCC-LM3細胞干擾AEG1表達后模擬失巢培養(yǎng)24小時，自噬GFP-RFP雙熒光系統(tǒng)檢測，以及WB顯示LC

5、3 Ⅰ型向Ⅱ型轉變減少，Ⅱ/Ⅰ型比值降低，自噬流減弱。干擾自噬基因，SMMC-7721、HCC-LM3模擬失巢培養(yǎng)24小時后，凋亡率明顯高于對照組（P<0.05）；過表達AEG1的SMMC-7721細胞中干擾自噬基因，模擬失巢培養(yǎng)24小時，凋亡率明顯高于對照組（P<0.05）。過表達/干擾AEG1的肝癌細胞模擬失巢培養(yǎng)24小時后，內質網應激反應通路被激活。
　　結論：AEG1、自噬都可增強肝癌細胞失巢凋亡抵抗能力，并且AEG1可以