骨髓與脂肪間質(zhì)干細胞神經(jīng)向分化能力比較研究.pdf

1、目的：神經(jīng)系統(tǒng)疾病如脊髓損傷、退行性病、多發(fā)硬化、運動神經(jīng)元病等，主要原因是神經(jīng)細胞的壞死、功能的缺失。干細胞(stem cells)是一類具有無限自我更新和多向分化潛能的細胞，在一定條件下，可分化為神經(jīng)元樣細胞和神經(jīng)膠質(zhì)樣細胞，有望作為神經(jīng)系統(tǒng)疾病細胞移植的種子細胞，但是干細胞種類繁多，據(jù)其發(fā)生學來源的不同可分為胚胎干細胞(embryonic stem cells，ESCs)和成體干細胞(adult stem cells，ASCs)，

2、其中ASCs是指存在于已分化組織的未分化細胞。ASCs較ESCs的優(yōu)點是取材相對方便，不存在倫理學問題。目前研究較多的成體干細胞主要是骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)，它取材方便，易于分離純化，神經(jīng)向分化能力的研究也比較多，已應用于前期臨床研究試驗，而脂肪間充質(zhì)干細胞(Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells，ADSCs)作為近年來新

3、發(fā)現(xiàn)的種子細胞，神經(jīng)向分化能力的研究還相對較少，但它具有BMSCs所不具備的優(yōu)點，如：獲取更為方便，對人體創(chuàng)傷小，很少受血液及免疫系統(tǒng)的影響等。本實驗旨在比較人類BMSCs與ADSCs的神經(jīng)向分化能力，為干細胞移植治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病篩選理想種子細胞。
　　 方法：1）采用Percoll分離法在體外培養(yǎng)及擴增BMSCs，利用胰酶消化的方法獲取ADSCs。通過表面抗原檢測的方法進行鑒定。2）采用多種生長因子聯(lián)合誘導方案誘導ADSCs、

4、BMSCs神經(jīng)向分化，即先用濃度為10ng/ml的bFGF預誘導24h，再加入20ng/ml的bFGF、20ng/ml的EGF、20ng/ml的BDNF，分別于24h、3d、7d、10d、14d時進行免疫熒光檢測Nestin、β-Ⅲ-Tubulin、NSE的表達，尼氏熒光染色檢測尼氏小體表達，觀察細胞形態(tài)變化。3）統(tǒng)計陽性細胞的比率，卡方檢驗分析統(tǒng)計結(jié)果。
　　 結(jié)果：1．采用percoll密度梯度離心法成功分離出人骨髓間充質(zhì)干

5、細胞，細胞表型鑒定為CD90陽性，CD106陽性，CD34陰性。2．通過對比ADSCs和BMSCs的生長曲線發(fā)現(xiàn)，脂肪間充質(zhì)干細胞較骨髓間充質(zhì)干細胞具有更強的增殖能力。3．利用生長因子聯(lián)合誘導的方式誘導BMSCs和ADSCs神經(jīng)向分化，誘導后，BMSCs和ADSCs細胞形態(tài)都發(fā)生了改變，胞體變圓并伸出細長突起，對于分化細胞的神經(jīng)細胞特異標記的鑒定也具有相同的趨勢：誘導中期Nestin、β-Ⅲ-tublin顯著增多，晚期稍降，而NSE和N