大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)元樣細胞誘導分化的研究.pdf

1、目的：探討大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)元樣細胞誘導分化的可能性。 方法：分離培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細胞，分別采用對照組、神經(jīng)節(jié)苷脂(GM1)120μg/L組，嗅鞘細胞上清液組對其進行誘導分化。采用倒置相差顯微鏡連續(xù)觀察細胞生長情況及形態(tài)變化。采用免疫組化法檢測神經(jīng)前體細胞的特異性標志神經(jīng)巢蛋白(Nestin)．神經(jīng)細胞的特異性標志神經(jīng)元特異性烯醇化酶((neon-specific enolase，NSE)、神經(jīng)絲蛋白(B-tubulin

2、)的表達。 結果：一，原代細胞情況：24 h后大量細胞貼壁，呈寬大扁平的成纖維細胞形態(tài)，細胞核漿分界清楚，多為單核，隨培養(yǎng)時間的延長，大部分細胞呈集落生長，并迅速增殖，集落大小不一，集落中的細胞呈典型的梭形細胞，集落之間互相靠近，一周后可達到80％融合，呈漩渦狀排列。二，傳代細胞情況：細胞很快貼壁，并分布均勻，與原代細胞相比，細胞形態(tài)更為單一，呈典型梭形。三，神經(jīng)細胞特異性標志測定：對照組僅見極少量的神經(jīng)前體細胞的特異性標志神經(jīng)

3、巢蛋白表達陽性，120μg/L神經(jīng)節(jié)苷脂溶液組、嗅鞘細胞上清液分別于誘導后2 h、6小時出現(xiàn)神經(jīng)巢蛋白Nestin表達陽性，6-8 h、24h后神經(jīng)細胞的特異性標志神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron-specific enolase，NSE)、神經(jīng)絲蛋白(β-tubulin)表達陽性。在一定時間內(nèi)，上述指標表達強度隨時間逐漸增加，在這個過程中發(fā)現(xiàn)nestin的表達要早于NSE和β-tubulin的表達，因為nestin是神經(jīng)前體細胞的標