心力衰竭lncRNABC088254表達(dá)與LVEF、BNP的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：
　　心力衰竭(heart failure，HF)或心功能不全，是指心臟的能量利用不足，收縮舒張障礙，排血量不能維持體內(nèi)代謝的需要，以致組織灌注量減少，體循環(huán)供血不足肺循環(huán)淤血，是心臟性病變的共同結(jié)局。當(dāng)心肌舒縮功能減弱時，為了保證機(jī)體的代謝，維持心臟的排血量，機(jī)體開始出現(xiàn)代償機(jī)制，主要體現(xiàn)在Frank-Starling機(jī)制、心肌纖維增生肥厚、神經(jīng)體液因子的釋放等代償性變化。因此目前檢測心力衰竭發(fā)生主要依靠檢測代償機(jī)制的出現(xiàn)

2、，例如心臟射血分?jǐn)?shù)、BNP、X線片等，但是檢測手段比較少，作用時間也比較短，近兩年發(fā)現(xiàn)IncRNA的作用不僅僅是基因的噪音，也可以編碼蛋白，分泌到血液中，很被證明是跟心力衰竭有關(guān)系，并且可以聯(lián)合進(jìn)行治療心力衰竭，本文涉及的IncRNABC088254之前有研究指出是心肌細(xì)胞能量利用的關(guān)鍵RNA，基因表達(dá)高低可能與心肌損害的程度有關(guān)。探討更多更敏感的心力衰竭指標(biāo)是目前臨床上治療心衰，提高生存率的迫切要求;關(guān)于心衰的發(fā)生機(jī)制也并沒有明確的闡

3、述，因此進(jìn)一步探究心衰的發(fā)生發(fā)展機(jī)制、提高疾病的診斷和治療水平是迫切需要進(jìn)行的。
　　方法：
　　1)取自山東省千佛山醫(yī)院6例擴(kuò)張性心肌病導(dǎo)致的心力衰竭的心臟組織，4例心功能相對正常的換瓣手術(shù)得來的乳頭肌組織為對照組，針對于年齡、性別進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。年齡的分布分析采取獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)的方式進(jìn)行分析;對于性別進(jìn)行四個表的卡方檢驗(yàn)即Chi-square test。分析的數(shù)據(jù)結(jié)果以P的值來表達(dá)，P＜0.05或者P＜0.01即為具有統(tǒng)計(jì)

4、學(xué)意義。
　　2)采用心肌組織檢測IncRNABC088254基因的表達(dá)水平證實(shí)IncBC088254在心力衰竭中的表達(dá)。在檢測IncRNABC088254的基因水平的同時針對于患者的左心室射血分?jǐn)?shù)和BNP的值進(jìn)行分析和數(shù)據(jù)處理，目的為了證明IncRNABC088254在心力衰竭疾病中的表達(dá)，同左心室射血分?jǐn)?shù)和BNP的值類似，并且對于這三者之間的關(guān)系進(jìn)行相關(guān)性研究。數(shù)據(jù)的分析處理采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)分布以均

5、值為中心的正態(tài)分布，數(shù)據(jù)計(jì)量資料應(yīng)用t檢驗(yàn)或單因素方差分析，采用Fisher確切概率計(jì)算法，P＜0.05被認(rèn)為數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01被認(rèn)為數(shù)據(jù)具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3)IncRNABC088254體外研究部分，通過同源轉(zhuǎn)錄本查找到大鼠的IncRNABC088254的序列，建立體外心肌細(xì)胞肥大模型，用血管緊張素Ⅱ刺激心肌細(xì)胞肥大，檢測肥大心肌細(xì)胞中IncRNABC088254相對于未加刺激細(xì)胞的表達(dá)水平;用Smart

6、Silencer（一種siRNA，特異性RNA干擾劑）干擾IncRNABC088254的表達(dá)，用RT-PCR檢測IncRNABC088254和其相關(guān)基因phb2的表達(dá)水平;同時培養(yǎng)心肌細(xì)胞干擾IncRNABC088254后提取蛋白，用蛋白凝膠電泳檢測phb2蛋白表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果：
　　1.針對患者的年齡、性別因素進(jìn)行分析，分析結(jié)果證明年齡的分布采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差來進(jìn)行描述，差異為P＞0.05,可認(rèn)為差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

7、;性別的分析用四格表的卡方檢驗(yàn)來進(jìn)行，最后結(jié)果表明，差異P＞0.05即可以認(rèn)為差異沒有意義。經(jīng)過對兩者的統(tǒng)計(jì)分析我們可以認(rèn)為年齡、性別的差別不能構(gòu)成對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。
　　2.病人心肌組織提取RNA，RT-PCR顯示IncRNABC088254在因心臟功能差需要換心手術(shù)的病人心室組織基因水平相對于心臟功能正常的瓣膜置換術(shù)乳頭肌是上調(diào)的，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜0.01。同時發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組IVSd與對照組的值相比明顯升高，左室射血分?jǐn)?shù)相

8、對于正常對照組較低(P＜.05);實(shí)驗(yàn)組BNP的水平較對照組表達(dá)量高，差異具有明顯意義(P＜0.01);實(shí)驗(yàn)組IncRNABC088254、BNP的表達(dá)值對照組明顯上調(diào)，差異有意義(P＜0.05)說明了這三者都與心力衰竭有關(guān)，后兩者是國際公認(rèn)的心機(jī)損害程度的標(biāo)志性因素，也可以大膽的推測IncRNABC088254的作用也類似，還可能是心力衰竭發(fā)生的重要因素。
　　3.為了驗(yàn)證想法，在心肌細(xì)胞肥大體外模型中，RT-PCR結(jié)果顯示在血

9、管緊張素Ⅱ刺激下IncRNABC088254以及相關(guān)基因phb2相較于對照組的表達(dá)水平上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜0.01; IncRNABC088254進(jìn)行干擾之后，結(jié)果證實(shí)IncRNABC088254的RNA層面基因表達(dá)比陰性對照組和空白對照組低，phb2基因RNA表達(dá)層面比陰性對照組和空白對照組也低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜0.05。蛋白電泳結(jié)果顯示phb2的蛋白灰度值比陰性對照組和空白對照組低，即蛋白表達(dá)水平較無干擾的表達(dá)水平低，差