鈍刺血蜱防御素基因的克隆、原核表達(dá)和功能分析.pdf

1、鈍刺血蜱（Haemaphysalis doenitzi）主要分布于中國(guó)的福建、云南、臺(tái)灣等地，多寄生在鳥(niǎo)類和小型哺乳動(dòng)物體表上，能攜帶巴貝斯蟲(chóng)等多種病原體，對(duì)野生動(dòng)物和人類造成嚴(yán)重危害。防御素(defensin)具有抵抗外來(lái)病原體的生物活性，在蜱類先天免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用。本研究以鈍刺血蜱為研究對(duì)象，通過(guò)基因克隆得到5條防御素基因序列，對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析（蛋白序列、同源性、理化性質(zhì)以及三維結(jié)構(gòu)），并對(duì)原核表達(dá)的重組蛋白進(jìn)行功能研究

2、（抑菌活性、抗氧化活性、溶血活性）。將5條基因分別命名為Hd-defensin-1、Hd-defensin-2、Hd-defensin-3、Hd-defensin-4、Hd-defensin-5，其開(kāi)放閱讀框分別為246bp、225bp、225bp、210bp和225bp;編碼氨基酸個(gè)數(shù)為88、74、74、69和74;成熟肽長(zhǎng)度為48、38、38、38和38;等電點(diǎn)大小為7.47、8.73、11.51、7.47和9.65。與NCBI中的

3、不同蜱源防御素進(jìn)行比對(duì)，同源性均達(dá)到60％以上，其中Hd-defensin-1和Hd-defensin-2與長(zhǎng)角血蜱的防御素(AB028926.1)同源性最高，為95％。
　　對(duì)Hd-defensin-3和Hd-defensin-5進(jìn)行原核表達(dá)，獲得重組蛋白rHd-defensin-3和rHd-defensin-5，抑菌活性的研究發(fā)現(xiàn)rHd-defensin-3和rHd-defensin-5對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌活性較強(qiáng)，對(duì)部分陰性菌有活

4、性，對(duì)真菌也存在一定的抗菌作用。熒光定量結(jié)果表明，在不同發(fā)育時(shí)期Hd-defensin-3在若蜱中的表達(dá)量最高，而各組織中在唾液腺的表達(dá)量最高，其次為中腸、卵巢、馬氏管;Hd-defensin-5在不同發(fā)育時(shí)期幼蜱和若蜱的表達(dá)量差異不顯著但均高于卵和成蜱期，各組織中在唾液腺表達(dá)量最高。菌脅迫檢測(cè)結(jié)果表明，Hd-defensin-3基因表達(dá)量與對(duì)照組比較差異不顯著;Hd-defensin-5表達(dá)量發(fā)生變化，且經(jīng)粘液菌脅迫后表達(dá)量最高?？寡?/p>