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文檔簡(jiǎn)介
1、鈍刺血蜱(Haemaphysalis doenitzi)主要分布于中國(guó)的福建、云南、臺(tái)灣等地,多寄生在鳥(niǎo)類和小型哺乳動(dòng)物體表上,能攜帶巴貝斯蟲(chóng)等多種病原體,對(duì)野生動(dòng)物和人類造成嚴(yán)重危害。防御素(defensin)具有抵抗外來(lái)病原體的生物活性,在蜱類先天免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用。本研究以鈍刺血蜱為研究對(duì)象,通過(guò)基因克隆得到5條防御素基因序列,對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析(蛋白序列、同源性、理化性質(zhì)以及三維結(jié)構(gòu)),并對(duì)原核表達(dá)的重組蛋白進(jìn)行功能研究
2、(抑菌活性、抗氧化活性、溶血活性)。將5條基因分別命名為Hd-defensin-1、Hd-defensin-2、Hd-defensin-3、Hd-defensin-4、Hd-defensin-5,其開(kāi)放閱讀框分別為246bp、225bp、225bp、210bp和225bp;編碼氨基酸個(gè)數(shù)為88、74、74、69和74;成熟肽長(zhǎng)度為48、38、38、38和38;等電點(diǎn)大小為7.47、8.73、11.51、7.47和9.65。與NCBI中的
3、不同蜱源防御素進(jìn)行比對(duì),同源性均達(dá)到60%以上,其中Hd-defensin-1和Hd-defensin-2與長(zhǎng)角血蜱的防御素(AB028926.1)同源性最高,為95%。
對(duì)Hd-defensin-3和Hd-defensin-5進(jìn)行原核表達(dá),獲得重組蛋白rHd-defensin-3和rHd-defensin-5,抑菌活性的研究發(fā)現(xiàn)rHd-defensin-3和rHd-defensin-5對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌活性較強(qiáng),對(duì)部分陰性菌有活
4、性,對(duì)真菌也存在一定的抗菌作用。熒光定量結(jié)果表明,在不同發(fā)育時(shí)期Hd-defensin-3在若蜱中的表達(dá)量最高,而各組織中在唾液腺的表達(dá)量最高,其次為中腸、卵巢、馬氏管;Hd-defensin-5在不同發(fā)育時(shí)期幼蜱和若蜱的表達(dá)量差異不顯著但均高于卵和成蜱期,各組織中在唾液腺表達(dá)量最高。菌脅迫檢測(cè)結(jié)果表明,Hd-defensin-3基因表達(dá)量與對(duì)照組比較差異不顯著;Hd-defensin-5表達(dá)量發(fā)生變化,且經(jīng)粘液菌脅迫后表達(dá)量最高??寡?/p>
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