白細(xì)胞介素35的蛋白表達(dá)與純化.pdf

1、白細(xì)胞介素是人體中參與免疫作用的細(xì)胞因子，具有十分重要的生理功能。白細(xì)胞介素家族成員眾多，其中白細(xì)胞介素35（Interleukin-35，IL-35）是一種非常重要的由異源二聚體組成的抑制性細(xì)胞因子，屬于白細(xì)胞介素12家族。在免疫調(diào)控中發(fā)揮重要作用，IL-35的研究會涉及很多炎癥的徹底治愈，機體的免疫耐受性，和自身免疫疾病的治療等許多方面。白細(xì)胞介素35作為最新的抑制性細(xì)胞因子，蛋白結(jié)構(gòu)未知成為了后續(xù)研究的限制性因素。
　　本研

2、究旨在獲得適合晶體解析的白細(xì)胞介素35及其受體的蛋白，構(gòu)建了原核表達(dá)系統(tǒng)中適合表達(dá)白細(xì)胞介素35單個亞基克隆表達(dá)載體以及真核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)中適合表達(dá)白細(xì)胞介素35單個亞基和融合蛋白的克隆表達(dá)載體，使白細(xì)胞介素35及其受體gp130可以穩(wěn)定表達(dá)。在原核表達(dá)系統(tǒng)中純化了包涵體蛋白及可溶蛋白，包涵體蛋白復(fù)性失敗，純化可溶蛋白能夠獲得目的蛋白。真核表達(dá)系統(tǒng)中，昆蟲細(xì)胞Sf21細(xì)胞和哺乳動物細(xì)胞293T細(xì)胞中無法進(jìn)行白細(xì)胞介素35單個亞基的表達(dá)，融

3、合蛋白表達(dá)量過低，僅在蛋白質(zhì)印跡法中可檢測。昆蟲細(xì)胞High Five中白細(xì)胞介素35的α鏈亞基p35，β鏈亞基受體蛋白gp130獲得了較好的表達(dá)。在獲取目的蛋白的過程中，首先采用了親和層析完成了對蛋白的初步提取，將得到的初步提取的蛋白進(jìn)行了離子交換層析，凝膠過濾層析柱分離雜蛋白，本研究最終獲得了均一、穩(wěn)定、折疊良好的白細(xì)胞介素35α鏈亞基IL12α-p35、β鏈亞基EBI3（Epstein-Barr virus-induced gen