白細胞介素-35對HepG2細胞功能的影響.pdf

1、原發(fā)性肝癌(primary liver cancer，PLC)是消化系統(tǒng)中常見的惡性腫瘤之一，其中肝細胞性肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)約占PLC的70-85％以上。據(jù)文獻報道，HCC是世界上常見的五大實體惡性腫瘤之一，在腫瘤相關致死原因中居第二位，僅次于肺癌，已成為全世界性公共健康問題。HCC患者行根治性手術切除（包括激進性切除）后，在其五年生存當中，轉(zhuǎn)移和/或復發(fā)率達到了60-70％。如此高的臨床轉(zhuǎn)

2、移和復發(fā)率其根本原因在于HCC對于傳統(tǒng)治療方法（化學藥物治療和放射介入治療）具有很強的耐受性。
　　HCC是一種免疫原性腫瘤，這提示我們免疫治療技術可作為治療HCC的一種有效選擇途徑。目前臨床實踐中，已有將細胞因子、疫苗和活化的免疫細胞輸注作為定向免疫治療HCC的治療方法。隨著近些年來研究深入發(fā)現(xiàn)，腫瘤局灶微環(huán)境中的免疫抑制性網(wǎng)絡是限制腫瘤免疫治療療效的主要因素之一。腫瘤細胞是腫瘤局灶微環(huán)境中的重要構成分子，其主要通過產(chǎn)生多種抑制

3、性細胞因子(如TGF-β和IL-10)和/或誘導調(diào)節(jié)性細胞產(chǎn)生(Tregs和Bregs)等途徑，參與惡性腫瘤內(nèi)部免疫抑制網(wǎng)絡的形成。細胞因子在信號傳導中擔當著重要角色，是體內(nèi)重要的生物信息分子。它對調(diào)控腫瘤免疫應答、維持機體內(nèi)環(huán)境免疫穩(wěn)態(tài)等生物學事件有著重要影響。白細胞介素-35(interleukins-35，IL-35)是近些年來發(fā)現(xiàn)并命名的新型因子，其歸屬于IL-12家族細胞因子。IL-35在結構上與該家族成員(IL-12、IL-

4、23和IL-27)具有相似性。但其在細胞來源和生物學功能等方面與同家族分子具有顯著的差異性。眾多文獻報道，IL-35在炎癥、器官移植、自身免疫及腫瘤等免疫方面均發(fā)揮著重要作用。IL-35是重要的負向調(diào)控因子，在調(diào)節(jié)性T細胞(Tregs)免疫功能的發(fā)揮中起著重要作用。Maryam等采用qRT-PCR方法，從基因水平檢測了40例乳腺癌患者和正常女性外周靜脈血中IL-35兩亞基(p35和Ebi3)和Foxp3信使RNA(mRNA)的表達水平。

5、結果顯示，乳腺癌患者外周靜脈血中p35、Ebi3和Foxp3mRNA水平明顯上調(diào)較正常女性。提示IL-35在乳腺癌患者中表達水平升高，同時也可能對Tregs功能的發(fā)揮是必要的。目前研究表明，IL-35在多種惡性腫瘤（如食管癌、前列腺癌等）患者的腫瘤標本和外周血中呈異常表達，但其在HCC患者中的表達情況及其對肝癌細胞的作用和機制罕見報道。因此，本研究旨在探討IL-35對HCC的作用及其對肝細胞癌細胞系HepG2功能的影響及初步機制。

6、>　　本實驗通過收集解放軍第三0九醫(yī)院肝膽外科確診的55例HCC患者外周靜脈血標本;同時留取16例年齡和性別分布無統(tǒng)計學差異的健康體檢者外周靜脈血標本為正常對照組。使用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測收集外周靜脈血中IL-35蛋白含量的表達情況。進一步運用外源性IL-35體外處理肝癌細胞系HepG2細胞。觀察IL-35對HepG2細胞增殖活性、侵襲和遷移生物學功能的影響及其可能發(fā)生機制。結果表明:1、HCC患者外周靜脈血上清中IL-35

7、蛋白含量[(118.45±28.66)ng/L]顯著高于健康體檢者外周靜脈血上清[(39.56±11.15)ng/L]，差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。2、外源性IL-35處理HepG2細胞組較對照組增殖活性、侵襲和遷移能力均具有顯著提高（P＜0.05）。3、IL-35對HepG2細胞的凋亡能力無明顯影響(P＞0.05)。4、流式細胞術(FCM)檢測發(fā)現(xiàn)，IL-35處理組(50μg/L)HepG2細胞表面受體gp130和IL-1

8、2Rβ2平均免疫熒光強度[(947.09±40.22)和(12.30±1.48)]相對陰性對照組[(785.89±89.68)和（9.07±2.01）]具有明顯的差異性(P＜0.05)。
　　通過以上實驗得出以下結論:1、HCC患者外周靜脈血上清中IL-35蛋白含量相較正常體檢者表達情況明顯上調(diào)，提示IL-35可能對HCC的發(fā)生發(fā)展具有一定的影響。2、IL-35具有促進HCC細胞增殖活性、遷移和侵襲的生物學特性。3、IL-35對H