茶多酚聯(lián)合表柔比星對人膀胱癌T24細胞增殖和凋亡的影響及機制.pdf

1、目的：據美國癌癥學會《2015年癌癥統(tǒng)計》稱，2015年膀胱癌新增病人約56320，繼續(xù)居男性新發(fā)腫瘤第4位，死亡病例約11510例。在所有這些病例中約70％以上為淺表性膀胱癌。目前對淺表性膀胱癌最主要的治療手段是經尿道膀胱腫瘤切除加術后灌注化療，但術后易復發(fā)，術后灌注化療是影響膀胱癌復發(fā)的一個重要因素。如何提高化療效果是目前臨床亟待解決的科學問題。表柔比星（epirubicin，EPI)是膀胱癌的常用灌注化療藥物，茶多酚（polyph

2、enols，TP)是一個重要的化療增敏劑，本研究通過體外細胞實驗，研究TP增強EPI誘導膀胱癌T24細胞凋亡的機制，為茶多酚聯(lián)合表柔比星治療膀胱癌的臨床應用提供理論和實驗依據。
　　方法：取不同濃度TP和EPI分別作用膀胱癌T24細胞24 h，經MTT試驗初篩，選擇藥物作用濃度TP（88.8μmol/L）和EPI（4.6μmol/L）。試驗分空白對照組、TP組（88.8μmol/L）、EPI組（4.6μmol/L）、聯(lián)合組（TP8

3、8.8μmol/L+EPI4.6μmol/L）共4組分別處理對數生長期T24細胞24 h，用Annexin V-PI雙流式細胞術檢測各組細胞的凋亡率；處理T24細胞8 h后，在透射電鏡觀察各組細胞胞質內自噬體的生成及變化；處理穩(wěn)定表達GFP-LC3的T24細胞8 h后，在熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白LC3熒光斑的形成與變化；處理T24細胞不同時間，用Western blot技術檢測自噬相關蛋白LC3-Ⅱ（8 h）、P62（8 h），凋亡

4、相關蛋白CASP3（16 h）、 PARP（16 h）表達變化；
　　結果： TP（88.8μmol/L）、EPI（4.6μmol/L）聯(lián)合處理組較單藥組引起的細胞增殖抑制率(F=730.411, P=0.000)和細胞凋亡率（ F=161.945, P=0.000）顯著提高。EPI（4.6μmol/L）單藥處理T24細胞可以誘導自噬，電鏡下細胞質內自噬體雙層膜結構形成增多；熒光顯微鏡下胞質內有明顯點狀熒光斑聚集形成，且含熒光斑的