碳青霉烯非敏感大腸埃希菌耐藥機(jī)制初步研究及分子流行病學(xué)調(diào)查.pdf

1、目的：了解我院2012年碳青霉烯非敏感大腸埃希菌（Carbapenem non-susceptible Escherichia coli，CNS E.coli）的耐藥情況，對(duì)碳青霉烯非敏感大腸埃希菌的耐藥機(jī)制作初步研究，并進(jìn)行分子流行病學(xué)調(diào)查。
　　方法：收集我院2012年1月至2012年12月分離的碳青霉烯非敏感大腸埃希菌分離株，通過(guò)檢驗(yàn)科 LIS系統(tǒng)（Laboratory Information System，LIS）查詢(xún)菌株

2、信息，微量肉湯稀釋法檢測(cè)其對(duì)各類(lèi)抗生素的MIC值；通過(guò)PCR（Polymerase chain reaction）技術(shù)檢測(cè)菌株中的碳青霉烯酶基因blaSME、blaKPC、blaIMP、blaVIM、blaNDM-1、blaOXA-48，ESBLs基因 blaCTX-M、blaTEM、blaSHV，氟喹諾酮類(lèi)耐藥決定因子（Fluoroquinolones resistance determinants，QRDs）基因qnrA、qnrB、

3、qnrC、qnrD、qnrS、aac(6’)-Ib-cr，氨基糖苷類(lèi)耐藥決定因子（Aminoglycosides resistance determinants，ARDs）基因armA、rmtB、aac(6’)-Ib，整合子基因Intl1，以及外膜蛋白（Outer membrane proteins， OMPs）基因ompC、ompF，并將檢出的耐藥相關(guān)基因進(jìn)行測(cè)序；脈沖場(chǎng)凝膠電泳（Pulse field gel electrophor

4、esis，PFGE）進(jìn)行分子流行病學(xué)的調(diào)查。
　　結(jié)果：1.2012年1月至2012年12月，我院共檢出大腸埃希菌1585株，其中非重復(fù)的碳青霉烯非敏感大腸埃希菌30株，占1.89％。CNS E.coli主要分離自尿液標(biāo)本（13株，43.3%），病區(qū)來(lái)源主要為外科病房和重癥監(jiān)護(hù)室，依次為肝膽外科（6株，20.0%）、泌尿外科（5株，16.7%）、重癥監(jiān)護(hù)室（5株，16.7%）和胃腸外科（3株，10.0%）；病人大多數(shù)為老年人，年齡

5、≧65周歲的為14人（46.7%），男性多于女性。
　　2.藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示：CNS E.coli菌株中有30株（100.0%）對(duì)厄他培南（Ertapenem，ETP）表現(xiàn)為非敏感，11株（36.7%）對(duì)亞胺培南（Imipenem，IPM）非敏感，1株（3.3%）對(duì)美羅培南（Meropenem， MEM）非敏感。100.0%（30/30）的CNS E.coli對(duì)至少一種頭孢菌素類(lèi)抗生素耐藥。氟喹諾酮類(lèi)抗生素和氨基糖苷類(lèi)抗生素的耐藥

6、率分別為96.7%（29/30）和63.3%（19/30）。
　　3.耐藥相關(guān)基因檢測(cè)結(jié)果顯示：有2株（6.7%）CNS E.coli攜帶碳青霉烯酶基因，且均為blaKPC-2；29株（96.7%）檢出的ESBLs基因：blaCTX-M（26/30，86.7%）、blaTEM（12/30，40.0%）；20株（66.7%）檢出QRDs基因：qnrA（5/30，16.7%）、qnrB（7/30，23.3%）、aac(6’)-Ib-c

7、r（13/30，43.3%）；11株（36.7%）檢出ARDs基因：，armA（1/30，3.3%）、rmtB（2/30，6.7%）、aac(6’)-Ib（11/30，36.7%），8株（26.7%）存在OMPs基因缺失：1株（3.3%）僅存在ompC基因缺失，5株（16.7%）僅存在ompF基因缺失，2株（6.7%）存在ompC、ompF基因同時(shí)缺失；整合子基因Intl1的檢出率為40.0%（12/30）。
　　4.在2株碳青霉

8、烯酶基因陽(yáng)性的菌株中，ESBLs基因、QRDs基因、ARDs基因和Intl1基因的聯(lián)合表達(dá)率分別為100.0%、50.0%、50.0%和50.0%，膜孔蛋白基因缺失率為0.0%；29株ESBLs基因陽(yáng)性的菌株中，QRDs基因、ARDs基因和Intl1基因的聯(lián)合表達(dá)率分別為65.5%、37.9%和37.9%，膜孔蛋白基因缺失率為24.1%。我們首次報(bào)道了聯(lián)合表達(dá) blaKPC-2、blaCTX-M-14’、blaCTX-M-55’、bla

9、TEM、aac(6’)-Ib-cr、qnrB、aac(6’)-Ib和 rmtB的多重耐藥大腸埃希菌分離株（已發(fā)表于 Infection, Genetics and Evolution雜志）。
　　5. PFGE結(jié)果顯示：30株CNS E.coli分屬于27個(gè)型別，提示我院CNS E.coli菌株呈現(xiàn)克隆多樣性，且這些菌株的流行并不是由克隆傳播導(dǎo)致的。
　　結(jié)論：1. CNS E.coli菌株主要分離自尿液標(biāo)本，病區(qū)分布以外科

10、病房和重癥監(jiān)護(hù)室為主；我院CNS E.coli菌株主要對(duì)厄他培南非敏感，亞胺培南非敏感次之，美羅培南非敏感最少，且大部分菌株表現(xiàn)為多重耐藥。
　　2.碳青霉烯酶基因并不是導(dǎo)致我院大腸埃希菌對(duì)碳青霉烯類(lèi)抗生素非敏感的主要原因，ESBLs基因聯(lián)合膜孔蛋白缺失可能是我院CNS E.coli產(chǎn)生的主要機(jī)制；多種耐藥基因的聯(lián)合表達(dá)可能會(huì)導(dǎo)致多重耐藥。
　　3.我院的CNS E.coli菌株呈現(xiàn)克隆多樣性，其流行并不是由克隆傳播導(dǎo)致的。