KiSS-1基因敲除對人低轉移性鼻咽癌細胞株轉移習性的干預研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：探索KiSS-1基因在敲除后對于鼻咽癌低轉移性細胞株SUNE-1-6-10B轉移能力的影響。
　　方法：（1）敲除鼻咽癌細胞株SUNE-1-6-10B中的KiSS-1基因，獲得低表達KiSS-1基因的鼻咽癌細胞株；（2）將基因敲除前后的鼻咽癌細胞株分別注入裸鼠腋下，觀察KiSS-1基因?qū)δ[瘤及其轉移灶的影響。
　　結果：（1）利用CRISPR/Cas9技術成功敲除了低轉移習性鼻咽癌細胞株SUNE-1-6-10B中的Ki

2、SS-1基因，并獲得了能夠穩(wěn)定低表達KiSS-1基因的鼻咽癌細胞株。（2）提取敲除了KiSS-1基因的鼻咽癌細胞株中的DNA進行SURVEYOR驗證，目的DNA片段PCR產(chǎn)物經(jīng)T7EⅠ酶切后，出現(xiàn)兩條額外的231bp和190bp的片段，說明 PCR產(chǎn)物經(jīng)緩慢退火時不能完全配對，能被錯配酶識別從而切斷成兩條小的DNA片段，證實CRISPR/Cas9系統(tǒng)成功在SUNE-1-6-10B細胞基因組上造成定點突變。提取基因敲除前后的 Kisspe

3、ptin蛋白（KiSS-1基因表達產(chǎn)物）進行Western blot驗證，結果表明，Kisspeptin蛋白在敲除了KiSS-1基因的鼻咽癌細胞株中明顯低表達。（3）將敲除了KiSS-1基因的鼻咽癌細胞株注入裸鼠腋下，每只裸鼠注入的細胞濃度為5×106/mL，細胞懸液量為2mL，將其作為實驗組；將同等濃度和體積的未經(jīng) KiSS-1基因敲除的鼻咽癌細胞株 SUNE-1-6-10B注入裸鼠腋下，將其作為對照組。結果顯示，實驗組和對照組移植瘤

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