KiSS-1基因敲除對人低轉移性鼻咽癌細胞株轉移習性的干預研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:探索KiSS-1基因在敲除后對于鼻咽癌低轉移性細胞株SUNE-1-6-10B轉移能力的影響。
  方法:(1)敲除鼻咽癌細胞株SUNE-1-6-10B中的KiSS-1基因,獲得低表達KiSS-1基因的鼻咽癌細胞株;(2)將基因敲除前后的鼻咽癌細胞株分別注入裸鼠腋下,觀察KiSS-1基因?qū)δ[瘤及其轉移灶的影響。
  結果:(1)利用CRISPR/Cas9技術成功敲除了低轉移習性鼻咽癌細胞株SUNE-1-6-10B中的Ki

2、SS-1基因,并獲得了能夠穩(wěn)定低表達KiSS-1基因的鼻咽癌細胞株。(2)提取敲除了KiSS-1基因的鼻咽癌細胞株中的DNA進行SURVEYOR驗證,目的DNA片段PCR產(chǎn)物經(jīng)T7EⅠ酶切后,出現(xiàn)兩條額外的231bp和190bp的片段,說明 PCR產(chǎn)物經(jīng)緩慢退火時不能完全配對,能被錯配酶識別從而切斷成兩條小的DNA片段,證實CRISPR/Cas9系統(tǒng)成功在SUNE-1-6-10B細胞基因組上造成定點突變。提取基因敲除前后的 Kisspe

3、ptin蛋白(KiSS-1基因表達產(chǎn)物)進行Western blot驗證,結果表明,Kisspeptin蛋白在敲除了KiSS-1基因的鼻咽癌細胞株中明顯低表達。(3)將敲除了KiSS-1基因的鼻咽癌細胞株注入裸鼠腋下,每只裸鼠注入的細胞濃度為5×106/mL,細胞懸液量為2mL,將其作為實驗組;將同等濃度和體積的未經(jīng) KiSS-1基因敲除的鼻咽癌細胞株 SUNE-1-6-10B注入裸鼠腋下,將其作為對照組。結果顯示,實驗組和對照組移植瘤

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