KiSS-1基因敲除對(duì)人低轉(zhuǎn)移性鼻咽癌細(xì)胞株轉(zhuǎn)移習(xí)性的干預(yù)研究.pdf

1、目的：探索KiSS-1基因在敲除后對(duì)于鼻咽癌低轉(zhuǎn)移性細(xì)胞株SUNE-1-6-10B轉(zhuǎn)移能力的影響。
　　方法：（1）敲除鼻咽癌細(xì)胞株SUNE-1-6-10B中的KiSS-1基因，獲得低表達(dá)KiSS-1基因的鼻咽癌細(xì)胞株；（2）將基因敲除前后的鼻咽癌細(xì)胞株分別注入裸鼠腋下，觀察KiSS-1基因?qū)δ[瘤及其轉(zhuǎn)移灶的影響。
　　結(jié)果：（1）利用CRISPR/Cas9技術(shù)成功敲除了低轉(zhuǎn)移習(xí)性鼻咽癌細(xì)胞株SUNE-1-6-10B中的Ki

2、SS-1基因，并獲得了能夠穩(wěn)定低表達(dá)KiSS-1基因的鼻咽癌細(xì)胞株。（2）提取敲除了KiSS-1基因的鼻咽癌細(xì)胞株中的DNA進(jìn)行SURVEYOR驗(yàn)證，目的DNA片段PCR產(chǎn)物經(jīng)T7EⅠ酶切后，出現(xiàn)兩條額外的231bp和190bp的片段，說(shuō)明 PCR產(chǎn)物經(jīng)緩慢退火時(shí)不能完全配對(duì)，能被錯(cuò)配酶識(shí)別從而切斷成兩條小的DNA片段，證實(shí)CRISPR/Cas9系統(tǒng)成功在SUNE-1-6-10B細(xì)胞基因組上造成定點(diǎn)突變。提取基因敲除前后的 Kisspe

3、ptin蛋白（KiSS-1基因表達(dá)產(chǎn)物）進(jìn)行Western blot驗(yàn)證，結(jié)果表明，Kisspeptin蛋白在敲除了KiSS-1基因的鼻咽癌細(xì)胞株中明顯低表達(dá)。（3）將敲除了KiSS-1基因的鼻咽癌細(xì)胞株注入裸鼠腋下，每只裸鼠注入的細(xì)胞濃度為5×106/mL，細(xì)胞懸液量為2mL，將其作為實(shí)驗(yàn)組；將同等濃度和體積的未經(jīng) KiSS-1基因敲除的鼻咽癌細(xì)胞株 SUNE-1-6-10B注入裸鼠腋下，將其作為對(duì)照組。結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組移植瘤