Kiss-1對裸鼠鼻咽癌移植瘤轉(zhuǎn)移的抑制作用.pdf

1、目的：（1）探討 Kiss-1基因在鼻咽癌轉(zhuǎn)移中的抑制作用（2）評價通過轉(zhuǎn)染技術(shù)把Kiss-1基因轉(zhuǎn)入體內(nèi)在鼻咽癌的防治中的應(yīng)用價值。
　　方法：（1）構(gòu)建了含Kiss-1重組慢病毒質(zhì)粒并轉(zhuǎn)染該基因低表達(dá)的鼻咽癌細(xì)胞株（SUNE-1-5-8F），并將其經(jīng)過嘌呤霉素的篩選，從而獲得了Kiss-1基因高表達(dá)的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞，并對其進(jìn)行培養(yǎng)、傳代、凍存及復(fù)蘇。（2）用Western blot來檢測轉(zhuǎn)染前后 Kiss-1蛋白的表達(dá)水平及熒光定量

2、反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)來檢測轉(zhuǎn)染前后Kiss-1mRNA的表達(dá)水平。（3）將轉(zhuǎn)染 Kiss-1的鼻咽癌細(xì)胞（SUNE-1-5-8F）及未轉(zhuǎn)染的鼻咽癌細(xì)胞（SUNE-1-5-8F）分別接種至40只裸鼠腋下，分為2組，每組20只，每周觀察2-3次腫瘤生長的情況，裸鼠養(yǎng)至2個月左右時將其處死，解剖出腫瘤及肝、肺等臟器，并對裸鼠腋下移植瘤行免疫組化檢查，在組織水平上驗證Kiss-1是否轉(zhuǎn)入鼻咽癌細(xì)胞（SUNE-1-5-8F）中，并對裸鼠肝肺行病理

3、檢查，比較兩組裸鼠肺肝等轉(zhuǎn)移瘤的多少，差別是否有意義。
　　結(jié)果：（1）我們將Kiss-1基因成功轉(zhuǎn)入鼻咽癌細(xì)胞株（SUNE-1-5-8F），完成了轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的培養(yǎng)、傳代、凍存、復(fù)蘇等。（2）轉(zhuǎn)基因組 Kiss-1蛋白及 mRNA的表達(dá)較空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組和對照組顯著增加(P<0.05)，另轉(zhuǎn)染組與未轉(zhuǎn)染組裸鼠腋下移植瘤行免疫組化檢查，結(jié)果示轉(zhuǎn)染組 Kiss-1基因的含量高，從而從基因、蛋白及組織水平上驗證了Kiss-1成功轉(zhuǎn)染到鼻咽癌