硬脊膜切開對(duì)脊髓損傷的療效觀察.pdf

1、脊髓損傷一般由于外界間接或者直接因素造成脊髓壓迫甚至斷裂，本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)建立大鼠脊髓損傷模型，研究硬脊膜切開對(duì)脊髓損傷的治療效果、手術(shù)時(shí)機(jī)及其治療機(jī)制進(jìn)行初步探討。
　　本文主要分為以下幾個(gè)部分:
　　第一章:硬脊膜切開、脊髓切開對(duì)大鼠脊髓損傷療效觀察
　　目的:
　　建立大鼠脊髓損傷模型，觀察硬脊膜切開、脊髓切開對(duì)大鼠脊髓損傷的療效。
　　方法:
　　選取成年SD大鼠65只，體重200～250g，雌

2、雄不限。取5只打開椎板，不進(jìn)行脊髓損傷，作為空白組，其余大鼠制作重度脊髓損傷模型，按隨機(jī)數(shù)字表法分為硬脊膜切開組（A組），脊髓切開組（B組），模型組（C組，打開椎板損傷脊髓不手術(shù)），每組各20只。
　　結(jié)果:
　　1、術(shù)后1d三組大鼠BBB評(píng)分均為0分，3d后大鼠運(yùn)動(dòng)開始恢復(fù)，A組恢復(fù)較明顯，但三組評(píng)分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;7d、14d開始A組明顯高于B組，B組高于C組（p＜0.05）。
　　2、術(shù)后MEP情況:術(shù)后1d三

3、組大鼠右后肢MEP潛伏期均較術(shù)前延長(zhǎng)，此后開始緩慢恢復(fù)。14d后A組潛伏期小于B組、C組，B組小于C組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)，波幅增加不明顯。波幅自7d后開始恢復(fù)，兩周后明顯，A組大于B組、C組，B、C組無(wú)差異。
　　3、脊髓含水量:術(shù)后1d，與正常值相比脊髓含水量明顯增加(p＜0.01)，其中C組數(shù)值最大，在術(shù)后各個(gè)測(cè)量時(shí)間點(diǎn)脊髓含水量均明顯高于A、B兩組，A組最低;3d后脊髓水腫現(xiàn)象最為嚴(yán)重，含水量最高，C組與其

4、余兩組相比差異顯著(p＜0.01);術(shù)后7d脊髓水腫現(xiàn)象減弱明顯，含水量顯著下降，但依然顯著高于正常值(p＜0.05);術(shù)后14d，各組大鼠脊髓水腫現(xiàn)象明顯好轉(zhuǎn)或基本消失，含水量接近正常值。
　　4、脊髓缺血面積:在術(shù)后1d，脊髓組織出現(xiàn)缺血現(xiàn)象，且C組現(xiàn)象最為明顯;術(shù)后3d，隨著脊髓水腫現(xiàn)象的加重，脊髓缺陷面積也達(dá)到最大;隨后大鼠脊髓組織逐漸恢復(fù)，缺血面積也逐漸減小，在術(shù)后14d缺血面積顯著減小，呈現(xiàn)出逐漸消除的趨勢(shì)。
　

5、　結(jié)論:
　　1、硬脊膜切開及脊髓切開后可減輕脊髓損傷水腫程度，改善供血，利于肢體功能恢復(fù)，以硬脊膜切開后更為明顯;
　　2、硬脊膜切開更有利于損傷區(qū)神經(jīng)元存活，減輕膠質(zhì)細(xì)胞增生及瘢痕形成，減少細(xì)胞凋亡。
　　第二章:硬脊膜切開術(shù)治療大鼠脊髓損傷時(shí)機(jī)的探討
　　目的:
　　觀察大鼠脊髓損傷后硬脊膜切開不同時(shí)間恢復(fù)情況，探討手術(shù)治療最佳時(shí)機(jī)。
　　方法:
　　健康成年清潔級(jí)SD大鼠60只，體重20

6、0-250g。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購(gòu)進(jìn)后進(jìn)行常規(guī)飼養(yǎng)，并觀察健康狀況及四肢活動(dòng)有無(wú)異常，7天后開始實(shí)驗(yàn)。大鼠按照上文使用的改良Allen's法制作重度脊髓損傷模型后，按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為A組（24h內(nèi)硬脊膜切開），B組（72h硬脊膜切開組），C組（對(duì)照組，損傷脊髓不手術(shù)），每組各20只。采用BBB運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分法觀察1d、1w、2w、4w、6w后大鼠后肢功能恢復(fù)情況，各時(shí)間點(diǎn)大鼠后肢MEP波幅、潛伏期;TTC染色觀察各組損傷區(qū)缺血面積;對(duì)損傷部位行

7、H-E染色、NF-200、GFAP免疫組化染色觀察脊髓結(jié)構(gòu)變化，神經(jīng)元存活狀態(tài)，及膠質(zhì)細(xì)胞演變情況。
　　結(jié)果:
　　1、BBB評(píng)分，術(shù)后1d評(píng)分均為0分，術(shù)后1w、2w各組大鼠后肢功能較為明顯恢復(fù)均大于C組(p＜0.05);術(shù)后4w，A組評(píng)分明顯高于B組和C組(p＜0.05)。
　　2、傷后1d三組潛伏期明顯延長(zhǎng)，1w后開始逐漸縮小，A、B兩組明顯較C組變小差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;2w以后A組較B組縮小更為明顯，B組較C組

8、縮小明顯;1d后三組波幅均明顯變小，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;2w波幅開始明顯增高，A、B兩組均較C組增大，A組波幅大于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　3、三組1d可見髓內(nèi)彌漫性出血，細(xì)胞大量壞死;2w出血完全吸收，脊髓結(jié)構(gòu)破壞，囊腔形成;6w纖維組織增生，瘢痕形成，C組較B組明顯，B組較A組明顯。
　　4、大鼠脊髓損傷后手術(shù)后2w，6w，A組NF-200細(xì)胞數(shù)均多于B組、C組;A組的GFAP陽(yáng)性細(xì)胞最少，C組最多。<

9、br>　　5、TTC染色情況:術(shù)后3組大鼠脊髓組織受損區(qū)域出現(xiàn)缺血現(xiàn)象;術(shù)后1w，各組脊髓缺陷面積差距最為明顯，其中C組面積最大，A組缺血面積最小;在術(shù)后2w，脊髓狀態(tài)好轉(zhuǎn)，A組缺血面積比1w時(shí)顯著減小，同時(shí)小于B組。4w后各組缺血面積與2w比較無(wú)明顯變化。
　　結(jié)論:
　　硬脊膜切開術(shù)24h組較72h組更明顯改善供血，促進(jìn)肢體功能恢復(fù)，72h后手術(shù)仍有意義;
　　第三章:硬脊膜切開術(shù)治療大鼠脊髓損傷的機(jī)制探討

10、　　目的:
　　轉(zhuǎn)錄組測(cè)序篩選脊髓損傷段差異表達(dá)基因，探討手術(shù)對(duì)脊髓損傷治療機(jī)制。
　　方法:
　　成年SD大鼠60只，體重200～250g，雌雄不限，按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為A組（硬脊膜切開組），B組（損傷脊髓不手術(shù)），C組（打開椎板不損傷脊髓）每組各20只，其中A組于脊髓損傷后24h時(shí)進(jìn)行硬脊膜切開，B組在脊髓損傷后不進(jìn)行硬脊膜切開手術(shù)。轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析差異基因情況;ELISA檢測(cè)并對(duì)比各組8h、1d、3d、7d、14

11、d的TNF-a、IL-1β、IL-6濃度;Western blot對(duì)比各組不同時(shí)間點(diǎn)AQP-4、NF-κB的表達(dá);對(duì)比各組8h、1d、3d、7d各時(shí)間點(diǎn)自噬相關(guān)蛋白Beclin-1和LC3的表達(dá)及凋亡關(guān)鍵蛋白Caspase-3的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1、差異基因:A1與B1之間上調(diào)表達(dá)的約76，下調(diào)表達(dá)的497個(gè);A2與B2之間上調(diào)表達(dá)的約182，下調(diào)表達(dá)的182個(gè);A3與B3之間上調(diào)表達(dá)的約27，下調(diào)表達(dá)的62個(gè)。差異基

12、因的功能涉及應(yīng)激反應(yīng)、離子通道、凋亡、信號(hào)傳導(dǎo)、炎性反應(yīng)、細(xì)胞代謝等諸多細(xì)胞生理過(guò)程。
　　2、硬脊膜切開對(duì)脊髓損傷后炎癥影響
　　IL-1β因子:A、B兩組在術(shù)后8h表達(dá)明顯增加，3d達(dá)高峰，以B組最為明顯;B組大于A組，A組大于C組(p＜0.05)。在術(shù)后14d后，各組大鼠脊髓中IL-1β因子表達(dá)明顯減少，A、B組相接近(p＜0.05)。IL-6因子:術(shù)后8h后開始升高，3d達(dá)高峰，B組高于A組，A組高于C組(p＜0.0

13、5)。在術(shù)后14d后明顯下降，A、B兩組差別無(wú)統(tǒng)計(jì)意義(p＜0.05)。TNF-α因子:在術(shù)后8h表達(dá)明顯增加，B組明顯高于A組(p＜0.05)。在術(shù)后3d達(dá)高峰，B組高于A組，A組高于C組(p＜0.05)。此后表達(dá)明顯下降。
　　3、硬脊膜切開對(duì)脊髓損傷后水腫影響
　　A、B組脊髓損傷后1dAQP-4蛋白表達(dá)開始增加，B組高于A組(P＜0.05);3d時(shí)AQP-4蛋白表達(dá)高峰，A組表達(dá)量仍小于B組(p＜0.05)，此后各組

14、表達(dá)量逐漸下降（圖7）。NF-kB蛋白免疫印跡檢測(cè):A、B兩組脊髓損傷后1d表達(dá)開始增加，以B組明顯(p＜0.05);3d時(shí)達(dá)高峰，A組表達(dá)量小于B組(p＜0.05);此后表達(dá)量下降。
　　4、硬脊膜切開對(duì)脊髓損傷后細(xì)胞自噬的影響
　　Western blot顯示，正常對(duì)照組脊髓組織中Beclin-1和LC3的蛋白含量較少，脊髓損傷后8h開始增加，1d后明顯增加，其中B組高于A組(p＜0.05)，在3d達(dá)高峰，其中A組低于B

15、組(p＜0.05)，此后逐漸開始下降。
　　5、硬脊膜切開對(duì)脊髓損傷后細(xì)胞凋亡的影響
　　Western blot結(jié)果顯示A組和B組脊髓組織Caspase-3的表達(dá)自脊髓損傷后8h即迅速上升，1d時(shí)B組高于A組（p＜0.05）;3d時(shí)表達(dá)達(dá)高峰，A組表達(dá)低于B組，A、B表達(dá)均高于C組(p＜0.05);直到7d仍有較高表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　1、硬脊膜切開術(shù)可能通過(guò)降低AQP-4蛋白表達(dá)減輕脊髓水腫;
　　2

16、、硬脊膜切開能夠減輕脊髓損傷區(qū)IL-1β、IL-6、TNF-α等炎癥因子的表達(dá)，減少炎癥反應(yīng);
　　3、硬脊膜切開可能通過(guò)抑制炎癥反應(yīng)中轉(zhuǎn)錄因子NF-kB表達(dá)，減輕炎癥反應(yīng)過(guò)程。
　　4、硬脊膜切開可減少自噬相關(guān)蛋白Beclin1和LC3的表達(dá)，減輕細(xì)胞自噬性損傷程度。
　　5、硬脊膜切開可減輕脊髓損傷后凋亡相關(guān)基因Caspase-3的表達(dá)，減輕細(xì)胞凋亡。
　　第四章:椎板減壓、硬脊膜切開、脊髓切開減壓治療脊髓損

17、傷的臨床觀察
　　目的:
　　觀察椎板減壓、硬脊膜切開、脊髓切開減壓治療脊髓損傷的效果，探討手術(shù)適應(yīng)、手術(shù)時(shí)機(jī)及治療機(jī)制。
　　方法:
　　以2013年1月至2016年9月本地區(qū)采用椎板減壓、硬脊膜切開減壓和脊髓切開減壓治療脊髓損傷患者23例，其中硬脊膜切開組10例、椎板減壓組12例、脊髓切開1例;采用美國(guó)脊髓損傷協(xié)會(huì)(America Spinal InjuryAssociation,ASIA)脊髓損傷分級(jí)，評(píng)價(jià)

18、手術(shù)療效。
　　結(jié)果:
　　術(shù)后MRI矢狀面T2WI像脊髓水腫信號(hào)消失，腦脊液高信號(hào)連續(xù)性恢復(fù);根據(jù)ASIA脊髓功能評(píng)價(jià)系統(tǒng)，2例A級(jí)患者術(shù)后1例提高為B級(jí)，1例仍為A級(jí)，但感覺平面下降3個(gè)階段;橈側(cè)腕伸長(zhǎng)短肌、中指指屈深肌、小指外展肌恢復(fù)1級(jí);13例B級(jí)患者6例恢復(fù)為C，6例恢復(fù)至D;8例C級(jí)患者6例恢復(fù)為D級(jí)，2例恢復(fù)為E級(jí)。1例髓內(nèi)切開患者，術(shù)前為B級(jí)，術(shù)后恢復(fù)至C級(jí)。
　　結(jié)論:
　　脊髓損傷后脊髓水腫，