COX-2和SPARC在口腔鱗癌中表達的研究.pdf

1、口腔頜面-頭頸鱗狀細胞癌（HNSCC)占成人惡性腫瘤的8％，口腔頜面-頭頸部腫瘤占全身惡性腫瘤的6.6%，而這其中鱗狀細胞癌又占到55.8%，口腔和下咽部為高發(fā)部位（20.9%），并呈逐年遞增的趨勢。2015年中國約有新發(fā)浸潤性癌病例數429.2萬，有281.4萬癌癥死亡病例，其中，唇、口腔、咽癌年新發(fā)病例4.81萬，年死亡病例2.21萬。幾乎22%的全球新發(fā)癌癥病例出現在中國，27%的癌癥死亡病例在中國。
　　OSCC大多臨近重

2、要的組織器官，使手術的范圍受到嚴重的制約，而且由于頭頸頜面組織血管、淋巴管豐富以及舌的頻繁機械運動，常發(fā)生早期頸淋巴結轉移，預后較差，死亡率高達50%，嚴重威脅著人們的生命健康。盡管腫瘤綜合治療的不斷發(fā)展，口腔鱗癌的治療取得了一定的進步，但是近20年，五年生存率沒有明顯改善。
　　由于口腔頜面-頭頸鱗狀細胞癌患者總體生存率很低，其發(fā)病相關的分子機制尚未明確，關于它的診斷與治療始終是惡性腫瘤治療領域的研究熱點。盡管眾多與腫瘤發(fā)生發(fā)展

3、相關的生物標志在多項前瞻性研究和 Meta分析中得到反復確證，但仍缺乏足夠的證據支持臨床應用，因此，與OSCC/HNSCC發(fā)生發(fā)展相關的分子標志的研究仍需不斷的探索。
　　初步研究顯示，環(huán)氧化酶-2(COX-2)與富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白（SPARC）在OSCC/ HNSCC組織中上調明顯，提示其與OSCC/ HNSCC發(fā)生和發(fā)展可能有相關性，可能是OSCC/ HNSCC復發(fā)、轉移和治療指導方面有價值的關鍵節(jié)點基因。
　　

4、目的：檢測SPARC和COX-2基因在口腔鱗狀細胞癌、癌旁、淋巴結以及正常組織中的表達，研究它們在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的可能作用機制以及相互關系；對SPARC和COX-2的甲基化情況進行初步的探討，驗證甲基化修飾水平是否能夠調控SPARC和COX-2在口腔鱗癌中的表達。
　　方法：應用免疫組織化學、蛋白質免疫印跡、實時定量聚合酶鏈反應技術檢測SPARC和COX-2基因在口腔鱗狀細胞癌、癌旁、淋巴結以及正常組織中的表達。甲基化特異性P

5、CR(MSP)檢測上述樣本中這兩個基因的甲基化狀態(tài)。統(tǒng)計學方法分析上述實驗結果。
　　結果:
　　1.免疫組化顯示COX-2在癌組織高表達，在正常組織中幾乎無表達；其表達含量隨腫瘤分化程度降低而逐漸增高，與腫瘤的臨床分期、病理分級、淋巴結轉移存在明顯正相關性。COX-2mRNA的表達量在癌、癌旁、轉移淋巴結組織標本中均高于正常粘膜組織，其中在癌組織的表達量最高；除Ⅳ區(qū)與Ⅴ區(qū)淋巴結組織中COX-2mRNA的表達量相比不具有統(tǒng)計

6、學意義以外，其余各組間COX-2mRNA的表達均具有明顯統(tǒng)計學意義。
　　2.免疫組化顯示SPARC在正常粘膜和癌旁組織呈現高表達，在癌組織中呈低表達或不表達。其表達與腫瘤分化程度和淋巴結轉移呈負相關。與正常粘膜組的SPARC mRNA表達量相比，除癌旁組織和Ⅴ區(qū)淋巴結不具有統(tǒng)計學意義以外，其余各組表達均低于正常粘膜組織。
　　3.Western blot發(fā)現COX-2和SPARC在正常組織、癌旁組織、口腔鱗癌和淋巴結組織中

7、有不同程度的表達，且蛋白表達水平與二者mRNA表達趨勢一致。
　　4. COX-2mRNA和SPARCmRNA的相對表達量在口腔癌組織、癌旁組織、頸部Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結中表現為顯著的負相關性。
　　5.在頭頸鱗癌多個細胞系中COX-2的表達強烈，SPARC表達沉默或低下，二者表達趨勢與所測癌組織中表達結果一致。
　　6.在OSCC組織樣本中，在癌組織，淋巴結組織中SPARC基因啟動子均出現了高甲基化，而COX-

8、2基因啟動子則出現非甲基化狀態(tài)。在正常組織中，COX-2基因啟動子則出現高甲基化，SPARC基因啟動子則表現出了非甲基化狀態(tài)。在癌旁組織中，COX-2和SPARC均表現為非甲基化。
　　7.在頭頸腫瘤Scc-9、Scc-25、Tca8113、HN13多個細胞系均發(fā)現SPARC基因啟動子區(qū)出現甲基化修飾，而COX-2基因啟動子區(qū)無甲基化條帶。在正常上皮細胞系hOMK則發(fā)現COX-2甲基化和SPARC非甲基化。
　　8.在舌癌細

9、胞株中COX-2基因啟動子23個CpG島僅有3~6個位點出現甲基化，甲基化率不足10%；SPARC的17個CpG島全部出現甲基化修飾。去甲基化處理后，SPARCmRNA的表達出現明顯上調；COX-2mRNA的表達無明顯變化，組間比較無統(tǒng)計學差異。
　　9. COX-2和SPARC蛋白表達狀態(tài)與啟動子區(qū)甲基化均存在著負相關關系。
　　結論：
　　1、COX-2在口腔鱗狀細胞癌中高表達，與臨床TNM分期的密切相關，可能是口

10、腔鱗狀細胞癌的促進因子。
　　2、SPARC在口腔鱗狀細胞癌中低表達，其表達缺失與臨床TNM分期關系密切，可能是口腔鱗狀細胞癌的抑制因子，可以作為口腔鱗狀細胞癌診斷的分子生物學標志物。
　　3、癌組織中SPARC啟動子區(qū)甲基化和COX-2啟動子區(qū)去甲基化是引起二者蛋白表達及mRNA表達異常的重要原因。
　　4、COX-2和SPARC的表達沿縱形淋巴鏈呈梯度變化，且它們的表達存在著負相關關系，二者在OSCC的發(fā)生發(fā)展過程