棘白菌素B脫酰基酶的重組表達及生物轉化棘白菌素B的研究.pdf

1、棘白菌素B（EchinocandinB，ECB）脫?；甘侵苽浼拙谺母核(Echinocandin B Nucleus，ECBN)的關鍵酶。ECBN主要通過ECB脫酰基酶催化ECB獲得。目前ECB脫?；复嬖诒磉_量低，催化效率不高等問題，無法滿足工業(yè)化生產(chǎn)。本論文通過將實驗室保藏的重組質粒pSET152-ecbD導入變鉛青鏈霉菌（Streptomyces lividans）TK24，并對介質催化ECB的工藝研究，主要研究結果如下:<

2、br>　　首先將重組質粒pSET152-ecbD通過E.coli ET12567/pUZ8002-鏈霉菌接合轉移導入變鉛青鏈霉菌中，菌落PCR檢測陽性重組子，催化反應驗證篩選得到產(chǎn)ECB脫?；傅闹亟M菌變鉛青鏈霉菌S.L152-1-6，粗酶液酶活是243U/L，是前期構建的天藍鏈霉菌重組菌表達酶活力的2.27倍。將重組質粒pUC19-ecb導入大腸桿菌E.coliBL21，初步探索ECB脫?；冈诖竽c中的表達，研究結果表明ECB脫?；?/p>

3、在大腸桿菌中實現(xiàn)可溶性表達，底物濃度0.2g/L。反應10h后，轉化率為20.1％。
　　研究了ECB脫?；冈谥軇w系中生物轉化ECB的過程，確定了甲醇為最佳助溶劑，研究結果表明，底物濃度為0.5g/L，甲醇添加量為9％(v/v)，pH6.5，溫度35℃，反應9h，ECB轉化率達到75.3％，是對照組的1.83倍。在反應體系中，底物濃度為0.7g/L時，將會產(chǎn)生較強的底物抑制，使酶活力下降。
　　為了解除底物ECB的抑制