增強綠色熒光蛋白真核表達載體pEGFP-N1-Rapsyn-Musk的構建.pdf

1、目的:應用基因融合技術,構建含有增強綠色熒光蛋白基因和突觸受體相關蛋白、肌肉特異性受體酪氨酸激酶重組融合基因的真核表達載體pEGFP-N1/Rapsyn/MuSK。
　　 方法:
　　 1、通過高保真PCR法,以pcDNA-Rapsyn為模板獲得Rapsyn目的基因,凝膠回收后用限制性內切酶雙酶切法將目的基因連接至真核表達載體pEGFP-N1,并轉化XL1-Blue感受態(tài)細胞。然后用NheI和XhoI雙酶切篩選陽性單克隆

2、重組子,獲得預期結果后進行序列測定、序列比對。
　　 2、通過高保真PCR法,以pcDNA-MuSK為模板獲得MuSK目的基因,凝膠回收后用限制性內切酶雙酶切法將目的基因連接至真核表達載體pEGFP-N1,并轉化XL1-Blue感受態(tài)細胞。然后用XhoI和EcoRI雙酶切篩選陽性單克隆重組子,獲得預期結果后進行序列測定、序列比對。
　　 3、用NheI和XhoI分別雙酶切測序正確的pEGFP-N1/Rapsyn和pEGF

3、P-N1/MuSK,凝膠回收Rapsyn基因片段和線性pEGFP-N1/MuSK并連接,轉化XL1-Blue感受態(tài)細胞后,用NheI和EcoRI雙酶切篩選陽性單克隆重組子,獲得預期結果后進行序列測定、序列比對。
　　 結果:
　　 1、通過高保真PCR法以pcDNA-Rapsyn為模板擴增出了1252bp的DNA片段,構建篩選的陽性重組質粒經(jīng)雙酶切得到在MarK1200bp附近的DNA片段,大小與預期結果相符,測序結果與

4、目的基因Rapsyn序列(已測序并BLAST)通過Vector NTISuite8軟件比對后一致。
　　 2、通過高保真PCR法以pcDNA-MuSK為模板擴增出了2657bp的DNA片段,構建篩選的陽性重組質粒經(jīng)雙酶切得到在Mark2000bp和3000bp之間的DNA片段,大小與預期結果相符,測序結果與目的基因MuSK序列(己測序并BLAST)通過Vectot NTI Suite8軟件比對后一致。
　　 3、構建篩選