穿心蓮內酯對胃癌SGC-7901細胞G2-M期的周期抑制與誘導線粒體途徑凋亡的研究.pdf

1、穿心蓮作為一種傳統(tǒng)中草藥主要用于治療感冒咳嗽，發(fā)燒，喉炎和一些感染性疾病。近年來，人們發(fā)現其提取物中有一種活性成分——穿心蓮內酯，具有治療多種疾病的功能，其中就包括對各種腫瘤細胞的殺傷作用。因此，在癌癥的化療上具有很好的潛在價值。胃癌是一種高發(fā)的惡性腫瘤疾病，好發(fā)年齡在50歲以上，男女比例為2∶1。目前臨床上對于胃癌治療手段還只限于手術治療，化療和放射治療;而且對于保守治療化療的藥物治療效果較差，因此找到新型的抗腫瘤藥物或者聯合用藥具有

2、重要意義。本研究重點是探索穿心蓮內酯對胃癌細胞SGC-7901的生長是否抑制和作用機理。
　　細胞活力檢測實驗(MTT)表明:SGC-7901細胞在不同濃度處理24和48小時后，穿心蓮內酯對腫瘤細胞具有濃度時間依賴的生長抑制效果;流式細胞技術檢測到藥物處理過后的細胞被抑制在G2/M期，并且伴有內源途徑凋亡的發(fā)生;并發(fā)現細胞內的ROS水平上升和線粒體膜電位的下降現象。Hoechst33258染色進一步證明細胞凋亡的存在;蛋白免疫印跡

3、法(western blot)檢測到周期與凋亡相關蛋白表達水平的變化;藥物處理過后，胃癌細胞內的ATP以及GSH水平明顯下調;NANDP補償實驗觀察到細胞的周期抑制得到恢復，但是β-萘黃酮預處理加強了穿心蓮內酯對周期的抑制。
　　p53蛋白表達量上調，與調控G2/M期的關鍵蛋白p-cdc2表達量上調、Cyclin B1表達水平下調表明，穿心蓮內酯對細胞的周期抑制的確發(fā)生在G2/M期，同時調控cdc2活性的蛋白cdc25與其活性調控

4、蛋白Chk2分別下調與上調表明穿心蓮內酯造成的G2/M期抑制與DNA損傷有關;Cleaved Caspase-3，Cleaved Caspase-9，和細胞色素c上調以及Bax的上調，Bcl-2的下調揭示穿心蓮內酯同時誘導了細胞線粒體內源途徑的凋亡。
　　細胞內GSH和ATP水平的下降與流式檢測到的ROS水平上升和膜電位的崩潰一致，ROS消除劑NAC與NADPH預處理后，對藥物造成的GSH和ATP下降有所恢復。此外NADPH的加入

5、還恢復了周期抑制，下調了p53，p-cdc2與Cyclin B1以及抑制了Cleaved Caspase-9，Bax的上調與Bcl-2的下調。這些說明穿心蓮內酯誘導的周期抑制和線粒體內源途徑的凋亡與活性氧有關。
　　總之，穿心蓮內酯是通過上調胞內ROS水平使得線粒體膜電位崩潰，進而通過p53/cdc2/Cyclin B1和Chk2/cdc25/cdc2信號通路誘發(fā)G2/M期的周期抑制與內源途徑的凋亡誘導抑制SGC-7901細胞的生