MAP4調控滋養(yǎng)細胞遷移在子癇前期發(fā)病中作用的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  子癇前期(pre-eclampsia,PE)是一個病因未明的復雜疾病,以母體高血壓、蛋白尿等為特征,約占妊娠婦女的5%-8%[1]。病情嚴重時,將導致母親子癇抽搐的發(fā)生以及胎兒宮內死亡。唯一確切的治療方式就是胎兒及其附屬物娩出,但卻增加了新生兒早產的發(fā)生率[2]。子癇前期治療效果不佳的癥結主要是其病因不明,目前的病因學研究主要集中在滋養(yǎng)細胞功能異常及早期胎盤形成不良。
  胎盤形成和胚胎植入是早期妊娠必經的過程,

2、是妊娠延續(xù)中最重要的決定因素之一。滋養(yǎng)細胞的侵襲為胎盤形成奠定基礎,其侵襲程度決定了胎盤的穩(wěn)定性和胎盤與蛻膜結合的深度。同時,滋養(yǎng)細胞錨定子宮螺旋動脈確保了胎兒有足夠的氧和營養(yǎng)物質供應,當滋養(yǎng)細胞侵襲不足、局部功能障礙,將導致許多嚴重的產科并發(fā)癥發(fā)生,如流產、子癇前期、胎盤早剝、死胎等。而滋養(yǎng)細胞侵襲過度將導致滋養(yǎng)細胞疾病的發(fā)生,如侵襲性葡萄胎、絨毛膜癌等,對母體的生命造成傷害。因此,只有胚胎侵襲入母體與母體在這一過程中的自救相互平衡,

3、胚胎才能得以順利孕育。早期胚胎中染色體核型異常時,大多數(90%)都被自然淘汰而流產了,而染色體核型正常的早期胚胎,大多數(93%)都繼續(xù)妊娠,顯著地體現了胚胎與母體之間的這一平衡[3]。因此,流產是滋養(yǎng)細胞侵襲失敗的結局,是自然質量控制的結果。所有影響滋養(yǎng)細胞侵襲和錨定在子宮螺旋動脈的因素,勢必決定著胚胎孕育的成敗。
  滋養(yǎng)細胞的侵襲受到胞內和胞外許多信號通路的精細調節(jié),涉及識別并消化細胞外基質、定向遷移等多個過程,其中,滋養(yǎng)

4、細胞的定向遷移是侵襲行為的關鍵步驟。
  與絕大多數細胞遷移模式相同,滋養(yǎng)細胞的定向遷移包括細胞極化、偽足形成、基質粘連、尾部釋放、胞體收縮等多個環(huán)節(jié),而細胞骨架和粘連結構的動態(tài)重組是一個基礎環(huán)節(jié),也是各種因素調控滋養(yǎng)細胞遷移的重要靶點[4,5]。細胞骨架主要由微管和微絲組成,我們課題組前期研究發(fā)現,表皮生長因子(EGF)通過微絲結構重組刺激人滋養(yǎng)細胞遷移,而關于微管與滋養(yǎng)細胞遷移之間關系的研究較少。微管是具有極性的中空管狀結構,

5、在細胞內的分布呈束網狀,并構成一個軌道運輸系統(tǒng),多種細胞物質如囊泡、細胞器等均順著其極性方向移動,并且,微管還參與中心粒等的裝配、細胞形態(tài)維持、細胞運動和分裂等過程[6,7]。微管骨架穩(wěn)定聚合的調節(jié)依賴于一系列結合于微管內、外側的微管結合蛋白(microtubule-associated protein,MAP),其中MAP4在人滋養(yǎng)細胞有表達,是促進滋養(yǎng)細胞微管穩(wěn)定延長的正性調節(jié)因素。微管在胞內的穩(wěn)定聚合、延長方向可以精確地指向細胞與

6、胞外基質粘連的粘著斑部位,微管向粘著斑移動與細胞周圍的粘著斑溶解有關。對于遷移的細胞,依賴微管的粘著斑溶解對于分解細胞后方粘著斑十分重要[8]。
  JEG-3細胞來源于人絨毛膜癌組織,其形態(tài)、生化標志、功能等細胞特征與絨毛組織原代培養(yǎng)的滋養(yǎng)細胞最為相似。因此,本實驗用JEG-3細胞研究人滋養(yǎng)細胞的遷移和可能機制。
  方法:
  第一部分:缺氧通過MAP4對滋養(yǎng)細胞遷移的調控及機制的研究
  1.常氧和低氧培養(yǎng)

7、滋養(yǎng)細胞,根據缺氧時間將細胞分為五組0h、6h、12h、18h、24h組;
  2.Transwell法分析滋養(yǎng)細胞侵襲性遷移能力;
  3.免疫熒光染色分析滋養(yǎng)細胞內微管、黏著斑結構變化;
  4.Western-blot法檢測蛋白表達的變化;
  5.使用EXCEL及SPSS軟件整理數據。
  第二部分:MAP4、細胞骨架蛋白在子癇前期患者胎盤組織中的表達
  1.搜集選取第三軍醫(yī)大學第三附屬醫(yī)院

8、(大坪醫(yī)院)產科2013年01月-2014年03月收治的重度子癇前期患者(PE組)20例和正常晚孕患者(control組)20例行擇期剖宮產后的胎盤組織;
  2.通過組織HE染色研究實驗組和對照組胎盤組織中絨毛和血管的差異;
  3.通過組織免疫組化研究胎盤絨毛組織中相關分子的定位及表達;
  4.提取胎盤絨毛相關蛋白,行western-blot分析其表達量。
  結果:
  1.低氧抑制滋養(yǎng)細胞侵襲,6

9、h組與0h組比較,侵襲能力明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);隨著缺氧時間的延長,滋養(yǎng)細胞侵襲能力進一步降低,12h組與0h組、6h組比較,18h組與12h組比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05);
  2.隨著缺氧時間延長,MAP4、微管蛋白表達逐漸降低,微管逐漸解聚、黏著斑逐漸聚合,黏著斑蛋白表達逐漸增多;
  3.與正常對照組相比,PE組胎盤組織血管痙攣、閉塞、血流量減少;
  4.與正常對照組相比,P

10、E組胎盤組織中微管蛋白和MAP4蛋白表達較少、黏著斑蛋白表達較多,與滋養(yǎng)細胞低氧環(huán)境中表達一致。
  結論:
  1.低氧環(huán)境中,MAP4的變化可能通過影響細胞骨架中微管的聚合和黏著斑的形態(tài)調控滋養(yǎng)細胞遷移;
  2.PE患者胎盤組織血管痙攣、閉塞、血流量減少,絨毛發(fā)育不良,可能與局部血管病變有關,為臨床胎盤缺血缺氧提供了直接證據。同時,PE患者胎盤組織中MAP4、α-tubulin、vinculin蛋白表達異常,可能

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